细菌感染实验诊断.ppt

第四节细菌分离培养与接种技术01绝大多数细菌在适宜的条件下可以生长，细菌感染性患者标本只有经过细菌的分离培养、鉴定和药物敏感试验，才可对感染性疾病进行病原学诊断并指导临床用药。因此，细菌培养对疾病的诊断、预防和治疗具有重要的作用。02细菌室必须安装严密的门窗，以防室内环境受到外界的污染。且室内禁用风扇，避免细菌的播散。细菌室必须安装供空气消毒的紫外线灯，置于操作台上面lm处，每天开始工作前照射20min。对其消毒效果要定期检查，及时更换失效的灯管。（一）细菌室的符合条件室内应备有消毒剂，用于试验中发生菌液洒溅时的及时消毒处理。同时还应备有供工作人员浸手用的盛有消毒剂的水盆、肥皂及自来水源等。室内操作台须每日用消毒剂擦洗，地面至少一周用消毒剂擦洗1次。对接收的标本、无菌器具、用过的物品等应明显分开井放在指定位置。同时要对用过的物品及时进行灭菌处理。细菌室应有当地的气温特点的消防设备。有两道门，其间应隔有缓冲区。无菌室应完全封闭，人员出入应用乳酸或甲醛熏蒸，彻底消毒。用前应以紫外线消毒30min，定期(二)无菌实验室在无菌室中一般仅限于分装无菌的培养基及传染性强的细菌的接种，不进行有菌标本的分离及其他操作。无菌室内应仅限操作人员进人，而且进入无菌室应着隔离衣和专用鞋，操作时戴口罩，随时保证室内的无菌状态。01条件有限的实验室，可用超净工作台代替无菌实验室进行相应的操作。超净工作台应选择垂直气流通风方式。无菌室应配备空调设备，保证不因室温而影响工作。02用于细菌培养的温箱、C02培养箱、厌氧培养设备；用于观察细菌形态及标本直接镜检的显微镜；用于物品灭菌的高压蒸气灭菌器、干烤箱；(三)基本设备和器具01用于储存培养基、诊断用血清、抗生素02及菌种等的冰箱和冷藏柜；03用于挑取标本、接种等的接种器具，包04括接种环和接种针；制备培养基时用的pH计；05用于接种器具灭菌的火焰灯或酒精灯；06还有各种必用的平皿、试管、吸管等玻璃器07皿，以及离心机、天平等。由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。适宜的培养基不仅可用于细菌的分离纯化培养、传代、菌种保存，还可用于研究细菌的生理、生化特性，是对病原菌分离鉴定的重要环节和必不可少的手段。二、培养基1营养物质:(1)蛋白胨；(2)肉浸液；(3)牛肉膏；(4)糖类；(5)血液；(6)无机盐类；(7)鸡蛋和动物血清；(8)生长因子：提供细菌生长繁殖所需要的氮源和碳源，还有生长因子。2凝固物质制备固体培养基时，加入琼脂，琼脂是半乳糖胶，98℃以上时可溶于水，在45℃以下则凝固成凝胶状态。3抑制剂和指示剂用于选择、鉴定及判断结果。(一)培养基的组成成分基础培养基含有生长所需的基本营养成分，称肉汤，用于增菌、检验，是制备其他培养基的基础成分。营养培养基在基础培养基中可加入葡萄糖、血液、生长因子等特殊成分，供营养要求较高的细菌和须要特殊生长因子的细菌生长。最常用的是血平板等。(二)培养基种类鉴别培养基利用细菌分解能力及代的作用底物和指示剂，观察细菌生长通过指示剂的反应不同来鉴别细菌。谢产物的不同，在培养基中加入特定过程中分解底物所释放的不同产物，如糖发酵培养基。选择培养基在培养基中加入抑制剂而抑制杂菌生长，有助于对所选择的细菌生长。特殊培养基包括厌氧培养基和细菌L型培养基等。依据卫生部临床检验中心推荐，应备有如下分离培养基：01血平板适于各类细菌的生长。01巧克力血平板其中含有V和X因子，适于接种疑有嗜血杆菌、奈瑟菌等的标本。01(三)分离培养基的选择促进G_菌生长，是较好的弱选择性培养基。01中国蓝平板或伊红美蓝平板有选择地03和沙门菌的分离。SS琼脂有较强的抑菌力，用于志贺菌02发酵菌鉴定的依据。麦康凯平板具中等强度选择性，是非碱性琼脂用于从粪便中分离霍乱弧菌及其它弧菌。01血液增菌培养基用于从血液、骨髓中分离常见病原菌。02营养肉汤用于标本及各类细菌的增菌。03平板划线分离法01连续划线分离法此法主要用于杂菌不多的标本。02分区划线分离法本法适用于杂菌量较多的标本。获得单个菌落。03三、细菌接种与分离技术01该法主要用于单个菌落的纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性。斜面接种法02多用于一些液体生化试验管的接种。液体接种法03的此法主要用于半固体培养基、明胶及双糖管的接种。穿刺接种法在试管内壁与液面交接处0