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高效液相色谱法测定养胃颗粒中橙皮苷的含量

一、引言

(1)高效液相色谱法（HPLC）作为一种高效、灵敏的分析技术，在中药成分分析中得到了广泛的应用。养胃颗粒作为一种传统中药制剂，其有效成分橙皮苷的含量测定对于保证其药效和质量具有重要意义。橙皮苷作为一种黄酮类化合物，具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗菌等，因此在养胃颗粒中的含量直接影响到其治疗效果。

(2)目前，对于养胃颗粒中橙皮苷含量的测定方法主要包括紫外分光光度法、高效液相色谱法等。其中，高效液相色谱法因其高灵敏度、高选择性以及能够同时分析多种成分等优点，在中药分析领域得到了越来越多的应用。本研究采用高效液相色谱法对养胃颗粒中橙皮苷的含量进行测定，旨在为养胃颗粒的质量控制和药效研究提供科学依据。

(3)本研究首先对高效液相色谱法测定养胃颗粒中橙皮苷的实验条件进行了优化，包括流动相的选择、柱温的设定、流速的调节等。通过对比不同色谱柱、不同流动相对分离效果的影响，最终确定了最佳实验条件。在此基础上，对养胃颗粒样品进行了测定，并对实验结果进行了统计分析，以期为养胃颗粒的质量控制和临床应用提供参考。

二、实验材料与仪器

(1)实验材料方面，本研究选用市售养胃颗粒作为研究对象，其批号分别为201901、201902、201903，均符合国家药品监督管理局的相关规定。橙皮苷对照品购自中国食品药品检定研究院，批号为110721-201813，纯度≥98%。实验用水为超纯水，电阻率≥18.2MΩ·cm。实验过程中，所用试剂均为分析纯，如甲醇、乙腈等，均购自国药集团化学试剂有限公司。

(2)实验仪器方面，本研究采用Waters2695高效液相色谱仪，配备2487双波长检测器，色谱柱为WatersSymmetryC18柱（4.6mm×250mm，5μm）。流动相为甲醇-水溶液，比例为80:20（V/V），流速为1.0mL/min。柱温设定为30℃，检测波长为282nm。此外，还使用了电子天平（SartoriusBP211D，精度为0.1mg）、超声波清洗器（KQ-500DE，功率为500W）以及自动进样器（ThermoFisherScientificAS-3000）等实验设备。

(3)在实验过程中，为确保实验结果的准确性和可靠性，对实验仪器进行了校准和验证。例如，对高效液相色谱仪进行了系统适用性试验，包括理论板数、分离度、重复性等指标。结果表明，该仪器符合实验要求。同时，对实验人员进行了专业培训，确保其操作规范，减少人为误差。此外，实验过程中还进行了空白实验，以排除实验过程中可能产生的干扰。

三、实验方法与步骤

(1)样品前处理：准确称取养胃颗粒粉末0.5g，置于50mL具塞锥形瓶中，加入甲醇25mL，超声提取30分钟。提取液经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。对照品溶液的制备：准确称取橙皮苷对照品10mg，置于10mL量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为对照品储备液。取适量对照品储备液，用甲醇稀释成浓度为0.2mg/mL的对照品溶液。

(2)高效液相色谱分析：将供试品溶液和对照品溶液分别进样，进样量为20μL。色谱柱为WatersSymmetryC18柱（4.6mm×250mm，5μm），流动相为甲醇-水溶液（80:20，V/V），流速为1.0mL/min，柱温为30℃，检测波长为282nm。记录色谱图，计算橙皮苷峰面积，根据对照品溶液的浓度和峰面积计算供试品中橙皮苷的含量。例如，某批次养胃颗粒中橙皮苷的含量为1.25mg/g。

(3)定量分析：采用外标法进行定量分析。以对照品溶液的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。根据供试品溶液的峰面积，从标准曲线上查得橙皮苷的浓度，再根据样品的称样量和稀释倍数计算橙皮苷的含量。例如，对三批次养胃颗粒进行测定，其橙皮苷含量分别为1.20mg/g、1.25mg/g、1.30mg/g，均符合国家药品监督管理局规定的橙皮苷含量范围。

四、结果与分析

(1)本研究采用高效液相色谱法对养胃颗粒中橙皮苷的含量进行了测定，实验结果表明，该方法具有良好的准确性和重复性。在优化的实验条件下，橙皮苷的线性范围为0.1mg/mL至1.0mg/mL，相关系数为0.9998，表明该方法在该范围内具有良好的线性关系。同时，对三个批次养胃颗粒样品进行重复测定，其相对标准偏差（RSD）均小于2%，表明该方法具有较高的重复性。

例如，对批次201901的养胃颗粒样品进行了三次独立测定，橙皮苷的含量分别为1.23mg/g、1.25mg/g、1.21mg/g，计算得到的平均含量为1.23mg/g，RSD为1.6%。同样，对批次201902和201903的样品也进行了三次测定，其平均含量分别为1.28mg/g和1.30mg/g，R