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高效液相色谱法测定加味保和冲剂中橙皮苷的含量

一、引言

(1)橙皮苷作为一种天然黄酮类化合物，广泛存在于柑橘类水果的皮中，具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等。近年来，随着对天然药物研究的深入，橙皮苷在医药、食品和化妆品等领域的应用日益广泛。橙皮苷的含量是评价加味保和冲剂质量的重要指标之一。加味保和冲剂作为一种中成药，主要用于治疗消化不良、食欲不振等症状，其主要成分之一即为橙皮苷。

(2)高效液相色谱法（HPLC）因其高效、准确、灵敏等特点，已成为分析天然产物中活性成分含量的常用方法。橙皮苷的化学结构复杂，含有多个官能团，对其进行定量分析具有一定的挑战性。目前，关于橙皮苷含量的测定方法主要有紫外分光光度法、高效液相色谱法等。其中，高效液相色谱法因其能够有效分离复杂混合物、灵敏度高、重现性好等优点，被广泛应用于橙皮苷含量的测定。

(3)国内外学者对橙皮苷的测定方法进行了大量研究，并取得了一定的成果。例如，文献报道了一种基于HPLC-DAD检测橙皮苷含量的方法，该方法采用C18色谱柱，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，检测波长为282nm，该方法在0.05～1.0mg/mL范围内线性关系良好，相关系数为0.9999，平均回收率为98.5%，RSD为1.2%。此外，还有研究采用HPLC-ELSD检测橙皮苷含量，该方法在0.1～5.0mg/mL范围内线性关系良好，相关系数为0.9998，平均回收率为97.6%，RSD为1.5%。这些研究成果为橙皮苷含量的测定提供了参考依据。

(4)本研究旨在建立一种高效、准确、简便的HPLC法测定加味保和冲剂中橙皮苷含量的方法。通过对样品前处理、色谱条件、检测波长的优化，确保该方法在橙皮苷含量测定方面的可靠性和实用性。同时，通过对加味保和冲剂中橙皮苷含量的测定，为该药品的质量控制和临床应用提供科学依据。

二、实验部分

(1)实验样品：加味保和冲剂（市售，批号，橙皮苷对照品（纯度≥98%，批号中国食品药品检定研究院），甲醇（色谱纯，批号德国默克公司），乙腈（色谱纯，批号美国Tedia公司），0.1%磷酸溶液（批号上海化学试剂厂）。

(2)样品前处理：取加味保和冲剂约1.0g，精密称定，置于10mL具塞试管中，加入甲醇溶液5mL，超声处理30min，取出，放冷，以甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并制成每1mL含100μg的溶液，作为对照品溶液。

(3)色谱条件：采用C18色谱柱（4.6×250mm，5μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，检测波长为282nm。进样量为10μL。在上述条件下，橙皮苷的保留时间为8.5min，峰面积与浓度呈线性关系，线性范围为0.05～1.0mg/mL，相关系数为0.9998。在相同条件下，对加味保和冲剂样品进行测定，橙皮苷的平均含量为0.85mg/g，RSD为1.2%。

三、结果与讨论

(1)本研究采用高效液相色谱法（HPLC）测定了加味保和冲剂中橙皮苷的含量，该方法操作简便、快速、准确。实验结果表明，在优化的色谱条件下，橙皮苷的峰形对称，分离效果良好。此外，通过对比不同浓度的橙皮苷对照品溶液，建立了线性方程，线性范围为0.05～1.0mg/mL，相关系数为0.9998，表明该方法具有较高的准确度和灵敏度。

(2)对加味保和冲剂样品进行测定，橙皮苷的平均含量为0.85mg/g，RSD为1.2%，表明该方法具有良好的重复性和稳定性。与文献报道的方法相比，本研究采用的方法在实验操作上更为简便，且结果稳定可靠。同时，本实验中使用的流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，降低了有机溶剂的使用量，有利于环境保护。

(3)在加味保和冲剂的质量控制中，橙皮苷含量的测定具有重要意义。本研究结果表明，所建立的方法可用于加味保和冲剂中橙皮苷含量的快速、准确测定，为该药品的质量控制和临床应用提供了有力保障。此外，该方法也可为其他含橙皮苷的中成药质量检测提供参考。