吸光光度法--课件.pptVIP

*******************吸光光度法吸光光度法是一种常用的化学分析方法，用于定量分析溶液中物质的浓度。通过测量物质对特定波长光的吸收程度，可以确定其浓度。学习目标掌握吸光光度法的基本原理了解吸光光度法测量物质浓度的原理，以及影响吸光度的因素。熟悉吸光光度法的操作步骤掌握使用紫外可见分光光度计进行测量的方法，并了解相关注意事项。学会绘制标准曲线利用标准溶液绘制标准曲线，并根据标准曲线测定未知样品的浓度。了解吸光光度法的应用范围熟悉吸光光度法在化学分析、药物检测、环境监测等方面的应用。吸光光度法概述吸光光度法是一种利用物质对特定波长光的吸收程度来进行定量分析的方法。该方法简单、快速、灵敏度高，广泛应用于化学、生物、医药等领域。吸光光度法主要基于比尔-朗伯定律，该定律描述了物质对光的吸收程度与物质浓度和光束通过溶液的光程长度之间的关系。该方法通常使用紫外可见分光光度计进行测量，通过测量物质对特定波长光的吸收值，可以确定物质的浓度。光的吸收与透射1光的吸收当光束照射到物质时，物质会吸收一部分光能，导致光束强度减弱。不同的物质吸收的光波长不同，例如，叶绿素会吸收蓝光和红光，而反射绿光。2光的透射光束穿过物质时，一部分光能被吸收，剩余的光能透过物质，形成透射光。透射光的光强取决于物质的性质和光束的波长。3光的反射光束照射到物质表面时，会发生反射。反射光的光强取决于物质的表面性质和入射角。吸光光度法的基本原理光束通过溶液光束通过溶液时，一部分光会被溶液中的物质吸收，另一部分光透过溶液。光强度与物质浓度溶液中物质的浓度越高，吸收的光就越多，透过的光就越少。吸光度与浓度呈线性关系吸光度与溶液中物质的浓度成正比，即溶液越浓，吸光度越高。影响吸光度的因素1物质的性质不同物质具有不同的吸光特性，吸收光谱也各不相同。2溶液的浓度溶液浓度越高，吸收的光量越多，吸光度也越大。3溶液的温度温度变化会影响物质的吸光特性，因此需要控制实验温度。4溶剂的性质溶剂的性质会影响物质的溶解度和吸光特性。贝尔定律1朗伯-比尔定律物质对光的吸收与溶液浓度和光束通过溶液的光程长度成正比2吸光度与浓度的关系吸光度与溶液浓度呈线性关系3吸光系数物质在特定波长下的吸光能力朗伯-比尔定律是吸光光度法的基础，它是指物质对光的吸收与溶液浓度和光束通过溶液的光程长度成正比。吸光度与溶液浓度呈线性关系，可以使用此关系来测定未知样品的浓度。吸光系数是物质在特定波长下的吸光能力，可以用它来量化物质对光的吸收程度。测定溶液浓度的步骤1.制备标准溶液精确称取已知质量的标准物质，溶解于已知体积的溶剂中，配制成已知浓度的标准溶液。2.测量样品吸光度将样品溶液放入比色皿中，在紫外可见分光光度计上测定其吸光度，得到吸光度值。3.绘制标准曲线用一系列已知浓度的标准溶液测定其吸光度，并将吸光度值与相应的浓度值绘制成标准曲线。4.计算未知样品浓度根据未知样品的吸光度值，从标准曲线上查得相应的浓度值，即为未知样品的浓度。检量线的绘制检量线是通过绘制一系列已知浓度溶液的吸光度值与对应浓度值之间的关系图得到的。它反映了物质在特定波长下的吸光度与浓度之间的线性关系，可以用于未知样品的浓度测定。检量线的线性范围检量线的线性范围是指在一定浓度范围内，吸光度与浓度之间呈线性关系的范围。线性范围是吸光光度法测定物质浓度的重要参数，它直接影响着测定的准确性和可靠性。0.1-1线性范围一般而言，检量线的线性范围在0.1到1之间。1最佳范围吸光度值在0.2到0.8之间，测定结果最准确。0.1小于0.1吸光度值小于0.1时，测定误差较大。1大于1吸光度值大于1时，光束被吸收殆尽，无法准确测定。检测下限与定量限检测下限定量限能够检测到的最小浓度能够准确测量的最小浓度信号与噪声之比为3:1信号与噪声之比为10:1检测下限是指仪器能够检测到的最小浓度，低于此浓度则无法检测到。定量限是指仪器能够准确测量的最小浓度，低于此浓度则无法获得准确的测量结果。仪器设备与操作紫外可见分光光度计该仪器是吸光光度法的重要设备，用于测定物质在紫外可见光区的光吸收特性。操作步骤包括仪器预热、空白校正、标准溶液制备、样品测定、数据分析等步骤。紫外可见分光光度计的构造紫外可见分光光度计主要由光源、单色器、样品池、检测器和数据处理系统组成。光源发射出紫外可见光，通过单色器将光束分离成单色光，然后照射到样品池中。样品吸收部分光，透射部分光，检测器接收透射光并将其转换为电信号，最后由数据处理系统