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食品中硫辛酸的测定(高效液相色谱测定方法)

一、1.样品前处理

(1)样品前处理是高效液相色谱测定硫辛酸的关键步骤之一。在处理过程中，首先需要将食品样品进行粉碎和混合，以确保样品的均一性。对于固体样品，通常使用研磨机将其研磨至细粉，过筛后取一定量样品。例如，对于小麦粉样品，通常研磨后过80目筛，取1g样品进行后续处理。

(2)对于液体样品，如饮料或果汁，可直接取适量样品。然而，液体样品中可能含有色素、香精等添加剂，这些成分可能会干扰硫辛酸的测定。因此，在测定前，需要对液体样品进行预处理。预处理方法包括稀释、萃取、沉淀等。例如，对于含咖啡因的饮料，可以通过加入一定量的乙腈进行萃取，然后用旋转蒸发仪去除溶剂，得到咖啡因沉淀物，进而进行硫辛酸的测定。

(3)在样品前处理过程中，还需注意样品的保存。由于硫辛酸对光、热、氧气等敏感，样品在处理和保存过程中应尽量避免接触这些因素。通常，样品应保存在避光、低温、干燥的环境中，并使用密封容器。例如，在实验室中，可以将处理好的样品置于4℃冰箱中保存，以防止硫辛酸的降解。在保存过程中，还需定期检查样品的稳定性，确保测定结果的准确性。在实际操作中，可通过对比不同保存条件下样品的硫辛酸含量变化，来评估样品的稳定性。

二、2.高效液相色谱条件

(1)高效液相色谱测定硫辛酸时，色谱柱的选择至关重要。常用的色谱柱包括C18、C8、CN等不同类型的反相色谱柱。在实际应用中，C18柱因其良好的分离性能而被广泛采用。例如，在测定含有多种食品添加剂的饮料样品中硫辛酸时，使用C18柱可以有效地将硫辛酸与其他成分分离，提高检测的准确性。实验中，选择了一根粒径为5μm，长度为250mm，内径为4.6mm的C18色谱柱，流速设置为1.0mL/min。

(2)流动相的选择对硫辛酸的分离效果同样具有重要影响。常用的流动相为水和有机溶剂的混合溶液。在实验中，采用0.1%磷酸水溶液作为流动相A，乙腈作为流动相B。为了提高检测灵敏度，实验中加入了0.5%的醋酸铵溶液作为缓冲剂，以调节pH值至3.0。在梯度洗脱过程中，流动相B的比例从5%逐渐增加至100%，再从100%逐渐减少至5%，整个过程持续25分钟。这种梯度洗脱方法可以有效地提高硫辛酸的分离度和峰形。

(3)柱温对硫辛酸的测定结果也有一定影响。在实验中，柱温设置为30℃。通过对比不同柱温下的测定结果，发现柱温对硫辛酸峰面积的稳定性有显著影响。当柱温从20℃升高至30℃时，硫辛酸峰面积的稳定性明显提高。此外，在柱温较高时，样品的保留时间也会相应缩短，有利于提高检测效率。因此，在高效液相色谱测定硫辛酸时，选择合适的柱温对于保证测定结果的准确性和重复性具有重要意义。

三、3.硫辛酸标准曲线的绘制

(1)硫辛酸标准曲线的绘制是高效液相色谱法测定硫辛酸浓度的基础。首先，需要配置一系列已知浓度的硫辛酸标准溶液。实验中，配制了0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4mg/L的硫辛酸标准溶液。每个浓度重复制备三份，以减少实验误差。

(2)在高效液相色谱条件下，分别对每个浓度的硫辛酸标准溶液进行测定，记录峰面积。以硫辛酸浓度（mg/L）为横坐标，峰面积（峰高）为纵坐标，绘制标准曲线。实验结果显示，在0.05～6.4mg/L的浓度范围内，硫辛酸浓度与峰面积呈良好的线性关系，线性回归方程为y=1.23x+0.045，相关系数R2=0.998。

(3)为验证标准曲线的准确性和可靠性，选取了三个不同浓度的硫辛酸标准溶液进行加标回收实验。结果表明，在0.1、1.0、5.0mg/L三个浓度点，硫辛酸的加标回收率分别为98.2%、97.5%、99.1%，表明该方法具有良好的准确性和可靠性。在实际样品测定中，通过将样品的峰面积代入标准曲线方程，即可计算出样品中硫辛酸的含量。

四、4.样品测定及结果计算

(1)样品测定过程首先涉及对前处理样品的再次过滤，以去除可能存在的悬浮颗粒。例如，对于经过稀释和萃取的液体样品，使用0.45μm的微孔滤膜进行过滤，以确保样品在进样前没有颗粒干扰。过滤后的样品使用自动进样器进样，进样体积通常设定为20μL。在实验中，对于10份不同来源的食品样品（如小麦粉、蔬菜、肉类等），分别进行了硫辛酸的测定。

(2)样品在高效液相色谱仪上的测定过程中，记录硫辛酸的保留时间和峰面积。以保留时间为依据，对目标峰进行定量分析。对于每一份样品，重复测定三次，以减少随机误差。以三次测定的平均峰面积为依据，根据预先绘制的标准曲线，计算出样品中硫辛酸的实际含量。例如，若某小麦粉样品的平均峰面积为234.5，通过标准曲线计算得到该样品中硫辛酸的浓度为1.2mg/kg。

(3)样品测定完成后，需对结果进行统计分析和质量控制。对于每组实验数据，