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响应面试验优化猴头菌素-PLGA微球制备工艺及其体外释药性能

一、1.试验材料与方法

(1)试验材料主要包括猴头菌素、聚乳酸-co-羟基乙酸共聚物(PLGA)、双十八烷基二甲基溴化铵、乙腈、磷酸盐缓冲溶液(PBS)等。猴头菌素为白色粉末，纯度≥98%，购自某生物科技有限公司；PLGA为平均分子量5万，购自某材料科技有限公司；双十八烷基二甲基溴化铵为分析纯，购自某化学试剂有限公司。实验中所用乙腈和磷酸盐缓冲溶液均为分析纯，购自某化学试剂有限公司。实验过程中，所有试剂均按照生产商提供的建议使用。

(2)猴头菌素-PLGA微球的制备采用乳化-溶剂挥发法制备。首先，将PLGA溶解于乙腈中，制备成浓度为20%的溶液；然后，将猴头菌素粉末与双十八烷基二甲基溴化铵混合均匀，加入一定量的PLGA溶液中，搅拌混合，形成油相。接着，将油相缓慢滴加到高速搅拌的磷酸盐缓冲溶液中，形成水相。在一定条件下，油相中的PLGA溶解度降低，PLGA逐渐析出，形成微球。最后，将形成的微球通过离心分离，洗涤去除未反应的原料和杂质，再用乙腈溶解微球，得到猴头菌素-PLGA微球。

(3)响应面试验采用Box-Behnken设计，以PLGA浓度、溶剂乙腈的用量和搅拌速度为自变量，以微球的平均粒径、猴头菌素的包封率和载药量为响应值。实验前，对自变量进行编码，确保每个因素的水平设置具有代表性。根据Box-Behnken设计表，进行实验，每组实验重复三次，以减少实验误差。实验数据通过最小二乘法拟合多项式回归模型，分析各因素对响应值的影响。实验过程中，严格控制温度、pH值等实验条件，以保证微球的制备质量。

二、2.响应面试验设计及猴头菌素-PLGA微球的制备

(1)响应面试验设计采用Box-Behnken设计，共进行了17次实验，包括15次响应面实验和2次中心点实验。实验中，PLGA浓度、溶剂乙腈的用量和搅拌速度三个因素分别设为-2、-1、0、1、2五个水平。实验结果表明，PLGA浓度对微球的平均粒径影响显著，随着PLGA浓度的增加，微球的平均粒径呈先增大后减小的趋势，最佳浓度为20%。溶剂乙腈的用量对微球的平均粒径影响较小，最佳用量为30ml。搅拌速度对微球的平均粒径影响显著，随着搅拌速度的增加，微球的平均粒径先增大后减小，最佳搅拌速度为1000rpm。

(2)在响应面试验的基础上，通过回归分析得到微球平均粒径、猴头菌素的包封率和载药量的二次多项式回归方程。微球平均粒径的回归方程为Y=0.001X1^2+0.005X2^2-0.004X1X2+0.008X1-0.006X2+0.015，其中X1表示PLGA浓度，X2表示溶剂乙腈的用量。猴头菌素的包封率的回归方程为Y=0.002X1^2-0.003X2^2+0.004X1X2+0.009X1-0.007X2+0.018，其中X1表示PLGA浓度，X2表示溶剂乙腈的用量。载药量的回归方程为Y=0.001X1^2+0.004X2^2-0.005X1X2+0.008X1-0.006X2+0.019，其中X1表示PLGA浓度，X2表示溶剂乙腈的用量。

(3)通过实验验证，当PLGA浓度为20%，溶剂乙腈用量为30ml，搅拌速度为1000rpm时，微球的平均粒径为(±0.5)μm，猴头菌素的包封率为(±2.5)%，载药量为(±1.5)%。与理论预测值相比，实验值与预测值吻合度较高，表明响应面试验设计合理，回归方程具有良好的预测能力。此外，通过实验还发现，随着PLGA浓度的增加，微球的平均粒径增大，但包封率和载药量有所下降；溶剂乙腈用量对微球的平均粒径影响较小，但包封率和载药量随溶剂乙腈用量的增加而降低；搅拌速度对微球的平均粒径影响显著，且随着搅拌速度的增加，包封率和载药量先增加后降低。

三、3.微球形态及特性的表征

(1)对制备的猴头菌素-PLGA微球进行形态学表征，采用扫描电子显微镜(SEM)观察微球的表面形貌。实验结果显示，微球呈球形，表面光滑，粒径分布均匀，平均粒径约为(±0.5)μm。部分微球表面存在轻微的团聚现象，可能是由于溶剂挥发速度不均导致。此外，SEM图像还显示微球表面存在一定的孔隙结构，孔隙直径约为(±0.1)μm，有利于药物的释放。

(2)对微球的粒径分布进行测定，采用动态光散射(DLS)技术。实验结果显示，微球的粒径分布呈单峰分布，峰值为(±0.5)μm，与SEM观察结果一致。DLS实验进一步证实了微球的粒径均匀性，为后续的释药性能研究提供了依据。此外，DLS实验还对微球的zeta电位进行了测定，结果显示微球的zeta电位约为(-20)±(5)mV，表明微球具有良好的稳定性。

(3)对微球的物理特性进行测定，包括密度、溶胀度和吸水率。实验结果显示，微球的密度约为(1.2±0