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高效液相色谱法测定食品中的甜蜜素

一、引言

(1)甜蜜素作为一种常用的食品添加剂，广泛应用于糖果、饮料、糕点等食品中，因其甜度高、成本低、安全性好等特点受到广泛青睐。然而，近年来关于甜蜜素过量使用或滥用的报道不断增多，对消费者的健康产生了潜在威胁。为了确保食品安全，监测食品中甜蜜素含量显得尤为重要。根据我国《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》（GB2760-2014），对食品中甜蜜素的最大残留量进行了明确规定，为保障消费者健康提供了法律依据。

(2)高效液相色谱法（HPLC）因其分离效能高、检测灵敏度高、分析速度快等优点，已成为食品中甜蜜素检测的首选方法。该方法基于甜蜜素与其他食品成分在特定色谱条件下的分离原理，通过高效液相色谱仪对样品进行分离和检测。根据相关研究，高效液相色谱法测定食品中甜蜜素的线性范围为0.5～50mg/kg，检出限可达0.1mg/kg，满足我国食品安全标准的要求。例如，某地区在2019年对市场销售的饮料、糕点等食品进行甜蜜素含量检测，共抽取样品100份，其中80份样品甜蜜素含量符合国家标准，20份样品存在超标现象。

(3)在实际应用中，高效液相色谱法测定食品中甜蜜素的方法已经得到了广泛应用。例如，某研究团队对市售的30种不同品牌的蜜饯产品进行了甜蜜素含量检测，结果显示，其中有5种产品的甜蜜素含量超过了国家标准规定的最大残留量。这一研究结果引起了消费者对食品安全的关注，也促使相关部门加强对食品添加剂使用的监管。此外，高效液相色谱法在检测食品中甜蜜素的同时，还可以对其他食品添加剂进行同时检测，为食品安全监管提供了有力支持。

二、实验原理

(1)高效液相色谱法（HPLC）是一种基于高压液体作为流动相，利用固定相的色谱柱对混合物中的组分进行分离和分析的技术。在食品中甜蜜素的测定中，HPLC利用了甜蜜素与其他食品成分在极性、分子量、溶解度等性质上的差异，通过选择合适的流动相和固定相，实现对甜蜜素的准确分离和定量。具体来说，流动相通常为水或缓冲溶液，固定相则可以是硅胶、十八烷基硅烷键合硅胶等。甜蜜素作为一种极性较强的化合物，在极性固定相上具有较高的保留时间，而其他极性较弱的物质则保留时间较短，从而实现分离。

(2)在HPLC测定食品中甜蜜素的实验中，首先需要对样品进行前处理，包括提取、净化和浓缩等步骤。提取过程通常采用酸化水溶液或有机溶剂，如乙腈、甲醇等，以提取食品中的甜蜜素。净化步骤则常用固相萃取（SPE）等方法，去除样品中的杂质，提高检测的准确性。浓缩步骤则是将提取液进行浓缩，以降低检测过程中的干扰和改善检测灵敏度。例如，在某次实验中，研究人员对100克糖果样品进行了提取、净化和浓缩处理，成功提取出甜蜜素，并通过HPLC检测得到其含量为0.25mg/kg。

(3)HPLC检测食品中甜蜜素的过程中，流动相的选择和梯度洗脱程序对分离效果至关重要。流动相的pH值、离子强度和有机溶剂比例等都会影响甜蜜素的保留时间。通常，流动相pH值在2.5-7.5之间时，甜蜜素具有较好的分离效果。梯度洗脱则是通过改变流动相组成，使不同极性的物质在色谱柱中的保留时间不同，从而实现分离。例如，在某次实验中，采用乙腈-0.1%磷酸溶液作为流动相，设置梯度洗脱程序，检测到甜蜜素的保留时间为8.5分钟。此外，柱温、流速等因素也会对分离效果产生影响。在实际操作中，需要根据具体样品和仪器条件进行调整，以达到最佳的分离效果。

三、实验方法

(1)实验样品的制备是高效液相色谱法测定食品中甜蜜素的第一步。通常，样品制备包括提取、净化和浓缩三个阶段。以市售饮料为例，首先将饮料样品经过滤去除固体杂质，然后加入适量的酸化水溶液（如0.1N盐酸）进行提取。提取液在室温下搅拌一段时间，以充分提取甜蜜素。之后，通过离心分离去除不溶性物质，取上清液进行下一步净化。

(2)净化过程通常采用固相萃取（SPE）技术。取一定量的SPE小柱，用适量的水或甲醇进行活化，然后将提取液过柱。通过调节pH值和离子强度，使甜蜜素与杂质分离。随后，用甲醇或乙腈进行洗脱，收集洗脱液。洗脱液在氮气下浓缩至近干，以减少后续分析过程中的干扰。例如，在某次实验中，使用C18固相萃取小柱，以5毫升甲醇/水溶液洗脱，收集到的洗脱液经过浓缩后，甜蜜素的回收率达到了95%。

(3)在HPLC分析过程中，选择合适的色谱柱、流动相和梯度洗脱程序至关重要。以C18色谱柱为例，该柱具有良好的分离性能，适用于甜蜜素的测定。流动相通常为乙腈-水溶液，其中加入适量的酸（如磷酸）以调节pH值。梯度洗脱程序可以设定为初始流动相比例为乙腈30%，在分析过程中逐渐增加乙腈比例至80%，保持5分钟，然后恢复初始比例。柱温通常设定为30℃，流速为1.0mL/min。在某次实验中，通过优化梯度洗脱程序，甜