代谢物酶学分析技术定义分类讲解.ppt

定义单酶反应酶偶联反应酶循环反应测定技术代谢物酶学分析技术是指用酶学分析的方法来测定人体内的代谢物或代谢产物浓度的技术。分类

一、单酶反应测定技术与酶活性测定方法类似技术简单，反应通式如下：ABE可监测产物待测物质工具酶

偶联：工具酶与待测酶、工具酶与工具酶之间的联合将作为试剂用于测定待测酶活性或底物浓度的酶分类：工具酶有氧化还原酶类、转移酶类和水解酶类(一）工具酶二、酶偶联反应测定技术

常用工具酶的名称及其缩写符号名称缩写符号名称缩写符号乳酸脱氢酶LDH苹果酸脱氢酶MDH葡萄糖-6-磷酸脱氢酶G-6-PD谷氨酸脱氢酶GLDH葡萄糖氧化酶GOD胆固醇氧化酶COD磷酸甘油氧化酶GPO过氧化物酶POD己糖激酶HK肌酸激酶CK丙酮酸激酶PK甘油激酶GK脂蛋白脂肪酶LPL胆固醇酯酶CE脲酶Ure肌酐酶Cr

应用：对于底物或产物不能直接测定或难于准确测定的酶促反应,可用于测定酶活性或底物测定。ExEaEiABCP待测物质中间产物终产物指示酶辅助酶待测酶(一）工具酶

（二）酶偶联反应的原理在应用酶偶联法测定时，关键在于确定恒态期，因为只有恒态期才能代表酶活性。如酶促反应底物动力学所述，恒态期可以通过测定指示酶的Km和Vmax等动力学因数加以计算确定。

（三）常用指示酶及其指示反应1.脱氢酶用作工具酶的脱氢酶都是以NAD(P)H为辅酶的脱氢酶，例如LDH、MDH、G-6-PD、GLDH等，它们催化下列反应：P+NAD(P)H+H+?PH2+NAD(P)+可对NAD(P)H在紫外吸收或紫外激发荧光进行测定应用：ALT、AST、CK等酶活性测定

2.过氧化物酶（POD）POD可催化过氧化氢与某些色原反应，例如与4-氨基安替比林（4-AAP）和酚反应，将其氧化为有色物质，反应如下：POD2H2O2+4-AAP+酚醌亚胺（红色）+2H2OTrinder反应：应用：GOD、COD、GPO、甘油氧化酶、尿酸酶（属于氧化酶类）等都可以将各自的底物氧化为过氧化氢，因此都可以与POD偶联，通过Trinder反应加以测定色原物质