高效液相色谱法测定桑叶γ-氨基丁酸和谷氨酸.docx

高效液相色谱法测定桑叶γ-氨基丁酸和谷氨酸

谌珍;刘青茹;张晓伟;贺晶;孙军燕;刘婧

【摘要】研究一种快速、精准可同时检测桑叶中γ-氨基丁酸和谷氨酸含量的色谱方法.通过研究料液比、提取温度、时间对提取率的影响,确立最佳提取条件为:80℃条件下,料液比5:1(mg/mL),分两次浸提,每次5min.以2,4-二硝基氟苯为柱前衍生试剂,AgilentTC-18色谱柱,以乙酸钠缓冲溶液-乙睛(50％)为流动相,梯度洗脱.此方法在0～0.05mg/mL范围内线性关系良好,γ-氨基丁酸和谷氨酸测定结果相对标准偏差均2％,平均加标回收率分别为88.024％、114.64％,所建立的方法可以用于桑叶中γ-氨基丁酸和谷氨酸含量的检测.为γ-氨基丁酸桑叶茶开发和利用提供理论与技术支持.

【期刊名称】《食品研究与开发》

【年(卷),期】2019(040)003

【总页数】5页(P162-166)

【关键词】桑叶;γ-氨基丁酸;谷氨酸;高效液相色谱;提取条件

【作者】谌珍;刘青茹;张晓伟;贺晶;孙军燕;刘婧

【作者单位】中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院,浙江杭州310016;中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院,浙江杭州310016;烟台北方茶叶推广中心,山东烟台264009;烟台北方茶叶推广中心,山东烟台264009;烟台北方茶叶推广中心,山东烟台264009;中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院,浙江杭州310016

【正文语种】中文

近年来，以γ-氨基丁酸（γ-aminobutyricacid，GABA）为功效因子的新型功能食品被广泛开发应用，GABA具有降压、治疗癫痫、增强记忆力等功效，而一般植物组织中的GABA含量很低，不能满足人体生理需求，桑叶为药食两用原料，具有明显的降血压和降血糖功效，特别是其中所含的GABA含量平均能达到226mg/100g[1]，而且我国桑叶种植广泛，是用来开发高γ-氨基丁酸茶的理想原料。桑叶中GABA是谷氨酸（glutamicacid，Glu）在谷氨酸脱羧酶的作用下水解而来，叶片中谷氨酸的含量也可以作为一个参照指标评价桑叶中γ-氨基丁酸提高的潜力。所以准确、高效测定桑叶中γ-氨基丁酸和谷氨酸的含量对于开发高γ-氨基丁酸桑叶茶尤为重要。

目前常用的测定γ-氨基丁酸的的方法主要分为高效液相色谱法[2-3]、Berthelot比色法[4-7]、改良纸层析法[8-9]。若采用纸层析法和比色法，因为桑叶内质成分复杂且含大量色素，会干扰γ-氨基丁酸和谷氨酸的测定，从而降低检测的精确性和灵敏度。而高效液相法测定结果准确，灵敏度高，可同时检测多种氨基酸。常用氨基酸柱前衍生试剂有异硫腈酸苯酯（phenylisothiocyanate，PITC）、邻苯二甲醛（o-phthalaldehyde，OPA）、2，4-二硝基氟苯（2，4-dinitrofluorobenzene，DNFB），PITC衍生时间短但操作繁杂，需要减压蒸馏去除多余衍生剂；OPA衍生反应迅速，但生成物不稳定，需快速进样，所以本试验选用2，4-二硝基氟苯作为衍生试剂，用高效液相色谱法同时测定γ-氨基丁酸和谷氨酸含量。同时简化样品前处理过程，确立提取的最佳参数，旨在建立准确、高效的γ-氨基丁酸和谷氨酸检测方法，为γ-氨基丁酸桑叶茶开发和利用提供理论与技术支持。

1材料与方法

1.1材料与试剂

样品：新鲜桑叶、中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院食品技术所自制GABA桑叶茶。

γ-氨基丁酸标准品（99%）、三乙胺、三水乙酸钠（均为分析纯）：阿拉丁公司；乙腈（色谱纯）：德国默克股份两合公司；乙酸：国药集团化学试剂有限公司；谷氨酸钠（食用级）：河南思远生物科技有限公司。

1.2仪器与设备

高效液相色谱仪（配Waters1525泵、Waters717plus自动进样器、Waters2487紫外检测器）：美国Waters公司；DU-S26电热恒温水浴锅：上海精宏实验设备有限公司；XW-80A旋涡混合器：上海精科实业有限公司；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵：郑州长城工贸有限公司。

1.3方法

1.3.1溶液配制

1）2，4-二硝基氟苯衍生溶液、pH9.0硼酸缓冲溶液和pH7.0磷酸缓冲溶液的配制参照文献[10]。

2）梯度洗脱溶液

A相：50mmol/LpH6.8乙酸钠缓冲溶液，（含1%三乙胺）。称取3.402g三水乙酸钠，用娃哈哈纯净水定容至500mL，加入0.5mL三乙胺，0.5mL冰乙酸，有机滤膜过滤，并超声脱气20min。

B相：50%乙睛水溶液，体积比为1∶1。有机滤膜过滤，并超声脱气20min。

1.3.2衍生、上样

取200μL待测液，加200μL硼酸钠缓冲液，20μLDNFB，封口膜密封，