清单04 PCR 专题 一案搞定PCR-备战2025年高考生物二轮热点背练清单（新高考通用）（解析版）.docx

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清单04PCR专题一次搞定PCR

1.【PCR基因定点突变】重叠延伸PCR

有个地方不清楚可沿引物3引物43′端延伸

我直接拿手写这样方便大家熟悉这个过程，以免高考题出信息情境题，所以这个方法还是要了解一下流程。

2.(实时)荧光定量PCR技术

先从样本中提取RNA，RNA中可能有新冠病毒的RNA，同时也存在很多采样患者的组织和存在于采样部位的微生物的RNA。通过逆转录酶将样本的RNA逆转录为cDNA，并进行PCR扩增，在PCR反应体系中，包含一对特异性引物以及一个Taqman探针，该探针为一段特异性寡核苷酸序列，两端分别标记了报告荧光基团和淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；若反应体系存在靶序列，PCR反应时探针与模板结合，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性将探针降解，报告基团与淬灭基团分离，发出荧光。每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子产生。荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数(Ct值)与病毒核酸浓度有关，病毒核酸浓度越高，Ct值越小(如图)。

3.RT-PCR技术

如果想克隆一段已知mRNA序列的cDNA，可使用反转录酶PCR（reversetranscrip1asePCR，RT-PCR）技术。RT-PCR与刚才介绍的PCR技术的主要区别在于它是从mRNA而不是双链DNA开始的。先利用反向引物在反转录酶催化下将mRNA反转录成单链DNA；DNA-RNA杂交链变性后，再用正向引物将单链DNA转换成双链DNA；接着在DNA聚合酶催化下，正向引物起始cDNA第二链合成，将单链DNA转换成双链DNA；最后用常规PCR技术扩增足量的cDNA用于克隆。

一、单选题

1．（24-25高三上·天津·阶段练习）某种二倍体植物的P1和P2植株杂交得F1，F1自交得F2。对不同个体的DNA进行PCR检测，产物的电泳结果如图所示，其中①～⑧为部分F2个体，上部两条带是一对等位基因的扩增产物，下部两条带是另一对等位基因的扩增产物，这两对等位基因位于非同源染色体上。下列相关叙述错误的是（????）

A．①②个体均为杂合体，F2中③所占比例大于⑤

B．还有一种F2个体的PCR产物电泳结果有三条带

C．①自交子代的PCR产物电泳结果有1/2与④电泳结果相同

D．③和⑦杂交子代的PCR产物电泳结果与②⑧电泳结果相同

【答案】C

【分析】基因自由组合定律的实质是：位于非同源染色体上的非等位基因的分离或自由组合是互不干扰的；在减数分裂过程中，同源染色体上的等位基因彼此分离的同时，非同源染色体上的非等位基因自由组合。

【详解】A、由题可知，这2对等位基因位于非同源染色体上，假设A、a分别为上部两条带的等位基因，B、b分别为下部两条带的等位基因，由电泳图可知P1为AAbb，P2为aaBB，F1为AaBb，F2中①基因型为AaBB，②基因型为Aabb，都为杂合子，F2中③基因型为AABb，占F2的比例为2/16，⑤基因型为AABB，占F2的比例为1/16，故F2中③所占比例大于⑤，A正确；

B、由电泳图可知，F2中①～⑧基因型依次为：AaBB、Aabb、AABb、aaBB、AABB、AAbb、aabb、AaBb，未出现的基因型为aaBb，其个体PCR产物电泳结果有三条带，B正确；

C、由电泳图可知，①基因型为AaBB，自交子代为AABB（占比为1/4）、AaBB（占比为2/4）、aaBB（占比为1/4），因此①自交子代的PCR产物电泳结果有1/4与④（aaBB）电泳结果相同，C错误。

D、由电泳图可知，③基因型为AABb和⑦基因型为aabb，杂交后代为Aabb、AaBb，其PCR产物电泳结果与②（Aabb）、⑧（AaBb）电泳结果相同，D正确；

故选C。

2．（24-25高三上·湖北·期中）图1是某单基因遗传病的遗传系谱图，该病在人群中的发病率为1/8100。科研人员提取了四名女性的DNA，用PCR扩增了与此病相关的基因片段，并对产物酶切后进行电泳（正常基因含有一个限制酶切位点，突变基因增加了一个酶切位点），结果如图2。相关叙述正确的是（????）

A．该病的遗传方式可能为伴X染色体隐性遗传

B．Ⅱ-1与Ⅱ-2婚配生一个患病男孩的概率为1/91

C．该突变基因新增的酶切位点可能位于310bp或118bp中

D．扩增Ⅱ-2与此病相关的基因片段，酶切后电泳将产生3种条带

【答案】D

【分析】分析图1，Ⅰ-1和Ⅰ-2表现正常，但生下了Ⅱ-2的患病女性，所以该病是常染色体隐性遗传病，用A/a表示控制该病的基因，所以，Ⅰ-1和Ⅰ-2基因型是Aa。从图2中可以看出，Ⅱ-3、Ⅱ-4和Ⅰ-2电泳图相同，