一种富含羟基酪醇和毛蕊花苷油橄榄多酚提取物长循环脂质体的制备方法.docxVIP

PAGE

1-

一种富含羟基酪醇和毛蕊花苷油橄榄多酚提取物长循环脂质体的制备方法

一、材料与仪器

(1)实验中使用的材料包括：油橄榄多酚提取物，其中羟基酪醇和毛蕊花苷含量分别为10%和8%；大豆卵磷脂，纯度为99%；胆固醇，纯度为99%；聚乙二醇-聚乳酸-聚乙二醇（PLGA），分子量在5000-10000Da之间；注射用水，符合中国药典规定。此外，实验还使用了荧光素钠（Fluoresceinsodium）、聚山梨酯-80（Tween-80）以及抗坏血酸作为稳定剂和荧光标记物。

(2)仪器设备包括：高速组织分散器，用于脂质体的制备；旋转蒸发仪，用于脂质体的干燥；低温恒温槽，用于温度控制；紫外-可见分光光度计，用于测定脂质体的粒径和多分散系数；透射电子显微镜（TEM），用于观察脂质体的形态；动态光散射仪（DLS），用于测定脂质体的粒径和Zeta电位；核磁共振波谱仪（NMR），用于分析脂质体的组成和结构；凝胶渗透色谱（GPC），用于测定脂质体的分子量分布；荧光分光光度计，用于测定脂质体的荧光强度。

(3)在实验过程中，油橄榄多酚提取物通过水蒸气蒸馏法提取，提取率为70%，符合药典要求。所制备的脂质体采用薄膜分散法，通过将油橄榄多酚提取物与大豆卵磷脂、胆固醇和PLGA在高速组织分散器中混合均匀，形成薄膜，然后在旋转蒸发仪中去除溶剂，最终得到干燥的脂质体粉末。该制备方法得到的脂质体粒径范围为100-200nm，多分散系数小于0.2，符合药理应用的要求。

二、长循环脂质体的制备方法

(1)长循环脂质体的制备首先采用薄膜分散法制备油橄榄多酚提取物负载的大豆卵磷脂脂质体。将大豆卵磷脂、胆固醇和PLGA溶解于氯仿中，形成均匀的溶液，然后将溶液在氮气下快速蒸发至干燥，得到薄膜。随后，将薄膜重新溶解于适量的去离子水中，加入油橄榄多酚提取物，超声处理30分钟，形成稳定的脂质体悬浮液。实验表明，该法制备的脂质体粒径分布均匀，平均粒径约为120nm，多分散系数小于0.2。

(2)为了实现长循环特性，在脂质体表面引入聚乙二醇-聚乳酸-聚乙二醇（PLGA）作为修饰材料。具体操作是将PLGA与大豆卵磷脂按照一定比例混合，通过薄膜分散法制备脂质体。在脂质体制备过程中，PLGA的加入量为5%，通过调节PLGA与大豆卵磷脂的比例，可以调整脂质体的长循环时间。研究发现，PLGA修饰的脂质体在体内循环时间显著延长，达到24小时以上。

(3)制备完成后，对脂质体进行表征分析。通过动态光散射仪（DLS）测定脂质体的粒径和Zeta电位，结果显示脂质体粒径范围为100-200nm，Zeta电位约为-20mV，表明脂质体具有良好的稳定性。此外，利用透射电子显微镜（TEM）观察脂质体的形态，结果显示脂质体呈球形，表面光滑，无明显的破损。通过荧光分光光度计测定脂质体的荧光强度，结果显示脂质体对羟基酪醇和毛蕊花苷的包封率分别为90%和85%，表明脂质体具有良好的药物负载能力。

三、表征与分析

(1)对制备的长循环脂质体进行了详细的表征与分析。首先，通过动态光散射仪（DLS）测定了脂质体的粒径分布，结果显示平均粒径为120nm，多分散系数（PDI）小于0.2，表明脂质体具有良好的均一性。此外，Zeta电位测定显示脂质体的Zeta电位为-20mV，表明脂质体表面带有负电荷，有利于其在体内的稳定性和靶向性。

(2)利用透射电子显微镜（TEM）对脂质体的形态进行了观察，结果显示脂质体呈球形，表面光滑，无明显的破损或聚集现象。此外，TEM图像还显示脂质体内部结构均匀，表明油橄榄多酚提取物成功负载于脂质体中。这一结果与荧光分光光度计测定的包封率相一致，表明脂质体对羟基酪醇和毛蕊花苷的包封率分别为90%和85%，具有较高的药物负载效率。

(3)通过核磁共振波谱仪（NMR）对脂质体的组成和结构进行了分析，结果显示脂质体中大豆卵磷脂、胆固醇和PLGA的比例与理论值相符。此外，NMR谱图还显示脂质体中的羟基酪醇和毛蕊花苷峰位与纯化后的油橄榄多酚提取物峰位一致，进一步证实了药物的成功负载。同时，通过凝胶渗透色谱（GPC）对脂质体的分子量分布进行了测定，结果显示脂质体的分子量分布较窄，平均分子量为5000Da，符合长循环脂质体的要求。