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人呼吸道合胞病毒实验室检测方法

A.1抗原检测

A.1.1免疫层析法检测HRSV抗原

A.1.1.1标本类型与处理

鼻咽拭子或咽拭子：将拭子放置于标本处理液中，将拭子在管壁挤压后取出，静置1min～3min。

鼻咽吸取物或支气管肺泡灌洗液：直接吸取300μL至试管中，同时加入300μL标本处理液，充分混

匀后，静置1min～3min。

A.1.1.2操作步骤

吸取适量A.1.1.1中处理后的待检标本处理液加入到标本检测孔中，水平放置；或将试纸条浸渍区

（下端）浸入A.1.1.1中处理后的待检标本处理液中，注意不要超出箭头标示的浸渍线，观察液体浸润至

结果区后，取出试纸条，水平放置。10min～15min内观察结果。

A.1.1.3结果判定

只在质控区出现一条特定颜色的线，无其他线出现，判定为阴性；质控区出现一条特定颜色的线，

同时标本检测位置也出现相同颜色的线，判定为阳性；质控线未出，或颜色异常，则此次检测无效，需

重新检测。

A.1.2直接免疫荧光法（DFA）检测HRSV

A.1.2.1标本类型与处理

将含有大量脱落呼吸道上皮细胞的标本（主要为鼻咽吸取物和支气管肺泡灌洗液）运输至实验室后，

450×g(2000r/min)，离心10min，弃上清液，加入1mLPBS清洗2次，450×g(2000r/min)离心10min，弃

上清液，加入150μLPBS吹打混匀，制备成浑浊细胞悬液。

A.1.2.2操作步骤

在生物安全柜内，吸取15μLA.1.2.1中细胞悬液滴加在洁净玻璃片上，冷风风干10min～15min；

浸入4℃预冷的丙酮溶液中，固定细胞10min；固定后的玻片可置于安全柜外操作，玻片风干后，在待

检标本片和对照玻片的细胞点位滴加约20μL荧光标记的抗HRSV抗体，37℃，湿盒内，孵育30min；用

PBST冲洗玻片1次，然后用PBST浸洗玻片2次（PBST不可重复使用）；除去多余液体，在细胞点位滴加

约20μL封闭液，覆上盖玻片；将玻片置于倒置荧光显微镜下观察结果。

A.1.2.3结果判定

镜下观察细胞浆内显示相应荧光标记颜色的荧光（如FITC标记则为绿色），说明形成了抗原抗体复

合物，提示细胞内存在HRSV抗原；如未呈现目的荧光不排除HRSV阳性。

A.1.3间接免疫荧光法（IFA）检测HRSV

A.1.3.1标本类型与处理

步骤同A1.2.1。

A.1.3.2操作步骤

在待检标本片和对照玻片的细胞点位滴加约20μL1：500倍稀释（用含1/40000伊文斯蓝的母液和

PBS新鲜配制）的抗HRSV的抗体（第一抗体，如鼠抗HRSV），37℃，湿盒内孵育30min，先用PBST

冲洗玻片1次，后用PBST浸洗玻片2次；在待检标本片和对照玻片的细胞点位滴加约20μL1:1000～10000

倍用PBS稀释的荧光标记的抗第一抗体的抗体（第二抗体，如羊抗鼠IgG），37℃，湿盒内孵育30min；

先用PBST冲洗掉玻片液体，后用PBST浸洗玻片2次；除去多余液体，在细胞点位滴加约20μL封闭液，

覆上盖玻片；将玻片置于倒置荧光显微镜下观察结果。

A.1.3.3结果判定

镜下观察细胞浆内显示相应荧光标记颜色的荧光（如FITC标记则为绿色），说明形成了抗原抗体复

合物，提示细胞内存在HRSV抗原；如未呈现目的荧光不排除HRSV阳性。

A.1.4注意事项

标本采集后应在4℃条件下运送至实验室进行检测，4℃保存时间宜不超过48h。

对于发病急性期采集的标本HRSV抗原检测阳性，说明病毒处于活跃的复制增殖状态，可确定为现

症感染；HRSV抗原检测阴性，不排除HRSV感染，临床高度怀疑HRSV感染的，应使用核酸检测方法进

行验证。

发病初期或病程较长的患者以及成人，不宜进行HRSV抗原检测；冻存过的标本不宜进行HRSV抗

原检测。

标本细胞数不足或源自呼吸道其他部位的标本，不适合使用免疫荧光法进行抗原检测。

使用免疫荧光检测方法在抗体孵育步骤应保持玻片湿润，抗体需要选择合适的稀释度。实验需同时

设置阳性对照和阴性对照，如阳性对照和阴性对照不满足条件，则本次实验失败。

标本检测步骤应在遵守质量控制和生物安全防护要求的条件下进行操作。应制定实验室质量保证

计划和实验室内部质量控制制度。