春第七章酶的非水相催化.ppt

4.温度的控制最适温度有机介质的最适温度高于水中的最适温度（水含量变小，热稳定增强）通过实验确定温度↑，立体选择性↓第41页,共73页，星期六，2024年，5月5.pH值的控制pH印记现象酶在冷冻干燥过程中，pH状态发生变化。因此，要加冷冻干燥保护剂可在有机介质中加入有机相缓冲液调节反应时的pH值第42页,共73页，星期六，2024年，5月Klibanov：酶在有机溶剂中活力低的原因及其解决原因说明解决办法扩散限制不少学者认为如此增加搅拌速率；减小酶颗粒尺寸封闭活性中心酶活有一定程度下降采用结晶酶替代构象改变冻干及脱水过程造成使用冻干保护剂底物脱离溶剂束缚能力差对疏水性底物尤其显著选择合适溶剂过渡态不稳定过渡态暴露于溶剂选择合适溶剂构象柔性降低无水溶剂尤为严重使水活度最适化亚最适pH值降低至少99%的酶活力从酶最适pH的水溶液中脱水；使用有机相缓冲液第43页,共73页，星期六，2024年，5月九、有机介质中酶催化反应及应用1、酶催化反应的类型合成反应（水解反应的逆反应）转移反应（酯与有机酸）醇解反应氨解反应异构反应氧化还原反应裂合反应第44页,共73页，星期六，2024年，5月（1）合成反应水解酶在有机介质中能催化水解的逆反应，即合成反应（why？）例：假单胞菌脂肪酶第45页,共73页，星期六，2024年，5月（1）合成反应蛋白酶在有机介质中能催化多肽的合成第46页,共73页，星期六，2024年，5月（2）转移反应酯交换反应（转酯反应）例：猪胰脂肪酶对外消旋体的拆分：第47页,共73页，星期六，2024年，5月（3）醇解反应醇解反应：酰卤、酸酐、酯等被醇分解，生成酯和其他化合物的反应例：假单胞脂肪酶催化酸酐醇解生成二酸单酯化合物第48页,共73页，星期六，2024年，5月（4）氨解反应脂肪酶催化酯类转变成胺类第49页,共73页，星期六，2024年，5月（5）异构反应D-ACL（D-3-amino-2-?-caprolactam）的异构化第50页,共73页，星期六，2024年，5月（6）氧化还原反应羰基的还原反应第51页,共73页，星期六，2024年，5月（7）裂合反应/加成反应羰基的加成反应第52页,共73页，星期六，2024年，5月超临界流体对多数酶都能适用，酶催化的酯化、转酯、醇解、水解、羟化和脱氢等反应都可在此体系中进行，但研究得最多的是水解酶的催化反应。这种溶剂体系最大的优点是无毒、低粘度、产物易于分离。??第9页,共73页，星期六，2024年，5月超临界流体的粘度介于气体与液体之间，其扩散性比一般溶剂高1-2个数量级。超临界气体在临界点附近的温度或压力有一点微小的变化都会导致底物和产物溶解度的极大变化，因而很容易调控超临界流体中酶催化反应的特性，如反应速率和选择性。第10页,共73页，星期六，2024年，5月??该体系的缺点是需要有能耐受几十个兆帕的高压容器，并且减压时易于使酶失活。此外，有些超临界流体如二氧化碳可能会与酶分子表面的活泼基团发生反应而引起酶活性的丧失。第11页,共73页，星期六，2024年，5月性质（1）超临界流体的P-V-T性质流体名称乙烷丙烷丁烷戊烷乙烯氨CO2二氧化硫水临界温度（℃）32.396.9150.0296.79.9132.431.1157.6374.3临界压力（Mpa）4.263.83.385.1211.287.387.8822.114.88临界密度(g/cm3)0.2200.2280.2320.2270.2360.4600.5250.3260.203第12页,共73页，星期六，2024年，5月（2）所谓超临界CO2是指纯净的CO2被加热或压缩到高于其临界点（临界温度31.1℃，临界压力7.28Mpa)时的状态。该流体具有无毒、无臭、不燃等优点。第13页,共73页，星期六，2024年，5月三、酶非水相催化的主要特点1.酶的热稳定性提高3.水解酶可以在非水介质中催化水解反应的逆反应2.酶的催化活性有所降低5.酶的底物特异性和选择性有所改变4.非极性底物或者产物的溶解度增加a.酶结构刚性增强，空间构象更加稳定b.水含量有限（酶分子的不可逆变性过程中，水是一个必要的参与者）第14页,共73页，星期六，2024年，5月1、有机溶剂与微量水组成的微水介质体系2、水与亲水性有机溶剂组成的互溶体系3、水与疏水性有机溶剂的双液相体系四