提取与分离第三节讲解.pptx

第三节提取与分离

二、色谱检识一、理化检识第四节检识

第二节理化性质一、理化检识物理方法主要利用生物碱的形态、颜色或熔点、比旋度等物理性质鉴定。化学方法克通过生物碱沉淀反应和显色反应进行鉴定。

第二节理化性质二、色谱检识（一）薄层色谱法1.吸附薄层色谱法（1）吸附剂吸附剂常用硅胶和氧化铝。硅胶适用注意：硅胶为酸性吸附剂，易造成拖尾或复斑，影响分离效果。可在涂铺硅胶薄层时加稀碱（0.1～0.5mol/L氢氧化钠）或缓冲溶液，制成碱性薄板；或使色谱过程在碱性条件下进行，即在展开剂中加入少量碱性试剂，如二乙胺、氨水等。氧化铝本身显弱碱性，不经处理便可用于分离和检识生物碱，一般较常用，特别适合分离亲脂性较强的生物碱。

第二节理化性质二、色谱检识（一）薄层色谱法1.吸附薄层色谱法（2）展开剂展开剂系统多以亲脂性溶剂为主，一般以三氯甲烷为基本溶剂。若Rf值太小，加入适量甲醇、丙酮等极性较大的溶剂；若Rf值太大，加入适量苯、环己烷等极性较小的溶剂。在展开剂中加入少量碱性试剂，如二乙胺、氨水等，可改善分离效果。

第二节理化性质二、色谱检识2.分配薄层色谱特别适用于分离有些结构十分相近的生物碱。（1）支持剂与固定相：通常选用硅胶或纤维素粉作支持剂，以甲酰胺或水为固定相。甲酰胺适合分离弱极性或中等极性的生物碱；水适合分离水溶性生物碱。

第二节理化性质二、色谱检识2.分配薄层色谱（2）展开剂：分离脂溶性生物碱，应以亲脂性有机溶剂作展开剂，如三氯甲烷-苯（1：1）等；分离水溶性生物碱，则应以亲水性的溶剂作展开剂，如BAW系统（正丁醇-乙酸-水=4：1：5，上层）。在配制流动相时，需用固定相饱和。

第二节理化性质二、色谱检识3.显色方法①有色生物碱可直接观察斑点；②具有荧光的生物碱在紫外光下显示荧光斑点；③大多生物碱的薄层色谱可用改良碘化铋钾试剂显色，显橘红色斑点。（如碘化铋钾不显色，可选用其他特殊显色剂）

第二节理化性质二、色谱检识（二）纸色谱生物碱的纸色谱多为正相分配色谱。1.固定相①水：可用滤纸本身含有的6%～7%水分，也可用水浸润滤纸；②甲酰胺：将甲酰胺溶于丙酮，再将滤纸置于其中浸湿片刻，取出，挥去丙酮即可；③酸性缓冲液（也称多缓冲纸色谱）：将不同pH值的酸性缓冲液自起始线由高到低间隔2cm左右的距离涂布若干个缓冲液带，晾干即可使用。

第二节理化性质二、色谱检识（二）纸色谱2.展开剂以水作固定相的纸色谱，宜用亲水性溶剂系统作展开剂，如BAW系统（正丁醇一乙酸一水=4：1：5，上层）；以甲酰胺和酸性缓冲液作固定相的纸色谱，多以苯、三氯甲烷、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂为主组成的溶剂系统作展开剂。展开剂在使用前也需用固定相液饱和。3.显色剂纸色谱所用的显色剂与薄层色谱法基本相同，但含硫酸的显色剂不宜使用。

第二节理化性质二、色谱检识（三）高效液相色谱生物碱的高效液相分析可采用分配色谱法、吸附色谱法、离子交换色谱法等。其中以分配色谱法中的反相色谱法应用较多。根据生物碱的性质和不同的色谱方法可选择相应的固定相。由于生物碱具碱性，使用的流动相以偏碱性为好。

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