分光光度技术讲解.pptx

分光光度技术

目录一、分光光度技术的基本原理二、分光光度计三、分光光度技术的定量方法

一、分光光度技术的基本原理Lambert-Beer定律Lambert-Beer定律是讨论溶液吸光度同溶液浓度和溶液层厚度之间关系的基本定律，该定律是分光分析的理论基础。其表达式为：A=KLC注：式中A为吸光度；K为比例常数，称为吸光系数；L为溶液层厚度，称为光径；C为溶液浓度。（Lambert-Beer定律适用于可见光、紫外光、红外光和均匀非散射的液体。）

二、分光光度计（一）分光光度计的分类分光光度计的分类红外分光光度计:可见光分光光度计:紫外分光光度计:测定波长范围为大于760nm的红外光区测定波长范围为400~760nm的可见光区测定波长范围为200～400nm的紫外光区

二、分光光度计（二）分光光度计的基本结构光源单色器比色杯检测器显示器五大部份5最常用的是可见分光光度计和紫外-可见光分光光度计结构：

三、分光光度技术的定量方法（一）标准曲线法其方法和步骤是：1）配制一组浓度不同的标准溶液(c1、c2……)；2）在一定波长下，分别测定其吸光度(A1、A2……)。3）以A为纵坐标，浓度c为横坐标，绘制曲线，得到一条通过原点的直线，称为标准曲线（A-c曲线）。4）用完全相同的方法和步骤测定待测溶液的吸光度Ax，从标准曲线上找出对应的浓度cx值（Ax?cx）。

Axcx空白标准溶液待测溶液c1c2c3c4cxc0标准曲线

三、分光光度技术的定量方法（二）比较法己知浓度CS的标准品和未知浓度CX标本作同样处理，使用相同的空白调零，同时测定标准管和标本的吸光度AS和AX，根据测定的吸光度及标准品浓度，可直接计算出标本的浓度，计算公式为：Cx=(Ax×Cs)/As

小结分光光度技术的基本原理分光光度计分光光度技术的定量方法【分光光度技术】

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