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饮用菊花脱毒原种苗繁育技术规程

1范围

本标准规定了饮用菊花（Chrysanthemummorifolium(Ramat.)TzveL.）脱毒原种苗的繁育技术要求和规程。

本标准适用于常见饮用菊花脱毒原种苗的生产。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19165-2003日光温室和塑料大棚结构与性能要求GB/T8321（所有部分）农药合理使用准则

NY/T1224-2006农用塑料薄膜安全使用控制技术规范

NY/T391-2021绿色食品产地环境质量NY/T496-2021肥料合理使用准则通则

NY/T1657-2008花卉脱毒种苗生产技术规程NY/T1591-2008菊花切花种苗等级规格

NY/T5121-2002无公害食品饮用菊花生产技术规程NY/T525-2021有机肥料

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1饮用菊花脱毒种苗（Drinkchrysanthemumvirus-freeseedlings）

指经RT-PCR检测方法鉴定，确认脱除了菊花B病毒（CVB）、番茄不孕病毒（TAV）、黄瓜花叶病毒（CMV）等的脱毒核心材料（或脱毒苗）在隔离条件下生产的原原种苗、原种苗。

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3.2原原种苗（breederseed）

指经组织培养过程直接获得的种苗。

3.3原种苗（foundationseed）

是指原原种苗繁殖的第一代苗。

4一般性要求

4.1产地环境产地环境符合NY/T391-2021的规定。

4.2场地要求选择排灌方便，地下水位较低，土层深厚、肥沃、疏松，3年内未种过茄科作物，中性或微酸性土壤地块种植。

4.3化学农药使用应符合GB/T8321（所有部分）的要求。

4.4肥料要求应符合NY/T496-2021和NY/T525-2021的要求。

5网室建造与隔离

一般宜南北向建造，钢架结构，大棚单体大棚宽8m，顶高不低于2.8m，连体棚可2～3联体，棚宽8m为宜，大棚肩高不低于1.5m，连体大棚宜在中间拱顶上分布避雨天窗散热。大棚长度可依据地形确定，最长不超过50m。大棚所有通风处安装60目防虫网。大棚搭建应符合GB19165-2003要求，大棚覆盖薄膜应符合NY/T1224-2006要求。大棚入口处宜配套缓冲间，田间操作人员进入防虫温、网室应更换工作衣和鞋具。

6原种苗生产

6.1原原种苗生产

6.1.1材料和培养基准备

选具有繁育品种典型性状、生长健壮的植株，至光照培养箱中采用变温升温的方式进行热处理，在日温/夜温分别为26℃/20℃下培养2d后，而后每2d昼/夜温度分别升高2℃,直至38℃/30℃,该温度下培养40d，取高温培养长出的茎段，剪去叶片，留取心叶或腋芽，放在烧杯中，用肥皂水冲洗干净，再用自来水冲洗1h。滤干，移入无菌操作台，用20%的次氯酸钠灭菌8min～10min，取出后用无菌水冲洗3～5次，待用。

将制备好的MS+6-BA0.1mg/L培养基溶液分装于培养瓶，每瓶30ml，瓶口盖紧瓶盖。在121℃,1.1MPa条件下灭菌20min，冷却后放入无菌操作台待用。

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6.1.2分化和继代培养

在无菌条件下，在解剖镜下剥取已灭菌材料的生长点0.3mm～0.5mm，接种到已灭菌的培养基上，置于26℃,光强2000lx～3000lx，光照时间16h/d条件下培养，一周左右茎尖转绿并萌动，20d～30d形成带芽茎段。

在无菌条件下将已分化的带芽茎段剪成小段，每段带1～2个腋芽，转入培养基（MS+6-BA0.1mg/L）中进行增殖，3～4周后获30～40个带腋芽芽段。

6.1.3病毒检测

取继代培养壮芽或叶片提取RNA，经RT-PCR检测方法鉴定，如没有病毒则继续培养，脱毒不彻底则弃之不用。具体操作见附录A。

6.1.4生根培养及炼苗移栽

6.1.4.1生根培养

将继代培养的茎段转入生根培养基（MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L）诱导生根，培养温度25℃~26℃,3～4周后95%均生根。

6.1.4.2炼苗移栽

瓶苗株高6cm～7cm，5～6片平展叶，生根5