园艺植物遗传转化.ppt

2.基本步骤及其应用农杆菌Ti质粒介导的植物基因转化方法有：叶盘转化法、原生质体共培养转化法、整株感染法等以上转化方法的基本程序包括：含重组Ti质粒的工程菌培养及转化；选择合适的外植体；工程菌与外植体共培养；外植体脱菌及筛选培养；转化植株再生及鉴定。3.优缺点优点：1）利用天然载体系统，成功率高，效果好；2）转移的外源基因常为单拷贝整合，很少发生甲基化和转基因沉默，遗传稳定，而且符合孟德尔遗传定律；3）费用低，方法简单，易于操作；4）与基因枪法结合使用，效果更佳；5）使用寄主范围广，几乎所有的双子叶植物都可采用此法。农杆菌介导的转化主要应用于双子叶植物和少数单子叶植物，大多数单子叶植物，尤其是禾本科作物对农杆菌不敏感，限制了它的应用范围；01农杆菌侵染后的外植体再生阶段脱菌比较困难，需要长期使用抗生素，给实验带来麻烦。02缺点：发根农杆菌介导的遗传转化Ri质粒是发根农杆菌染色体外的遗传物质，与Ti质粒相似，属于巨大质粒，大小为200~800kb。Ri质粒与Ti质粒不仅结构、特点相似，而且具有相同的寄主范围和相似的转化原理。产生毛状根种质转化法定义：以植物自身种质细胞为媒介，将外源DNA导入完整植物细胞，实现遗传转化的技术称为种质转化系统，该技术也称为生物媒体转化系统或整株活体转化。方法简便易行，并与常规育种紧密结合目的DNA可以是裸露的DNA，也可以是总DNA或重组质粒DNA，还可以是某些DNA片段；转化过程依靠植物自身的种质系统或细胞结构来实现，不需要细胞分离、组织培养和再生植株等复杂技术；种质转化法具有的特点：植物原位真空渗入法01转化原理02原理：将适宜转化的健壮植株倒置浸于装有携带外源目的基因的农杆菌渗入培养基的容器中，经真空处理、造伤，使农杆菌通过伤口感染植株，在农杆菌的介导下发生遗传转化。032.基本步骤及其应用植物原位真空渗入法的基本步骤：1）培养生长到一定阶段的植物，一般是开始现蕾至开花初期；2）制备含目的基因的农杆菌菌液；3）将植物倒置浸泡于农杆菌菌液中，进行真空处理；4）感染植物种植于土壤中，生长发育，直到收获种子；5）种子在选择培养基上发芽，进行抗性筛选，获得转化后代。优缺点植物原位真空渗入法的优点：简便、快捷，实验可靠、成本廉价，不需要进过组织培养阶段即可获得大量转化植株，转化率高；植物原位真空渗入法的缺点：在遗传转化时需要真空装置，真空处理前后植株的拔取和重新栽培增加了工作量；应用范围较窄，需要进一步的开发。花粉管通道转化法定义：花粉管通道转化法是一种借助于植物自身的生殖卵细胞或受精卵为转化对象的直接转化技术。转化原理在植物授粉后向子房注射含目的基因的DNA溶液，利用植物在开花、受精过程中形成的花粉管通道，将外源DNA导入受精卵细胞，并进一步地被整合到受体细胞的基因组中，随着受精卵的发育而获得转化植株。2.基本步骤及其应用基本程序包括：1）外源DNA的制备；2）根据受体植物受精过程及时间，确定导入外源DNA的时间及方法；3）将外源DNA导入受体植物；4）转基因植物目标性状的鉴定及分子检测。利用花粉管通道法导入外源基因的方法通常为：花粉粒与外源DNA混合授粉法、花粉粒培养法、柱头滴柱法、花粉粒转化法和微注射法等。3.优缺点优点：1）不依赖于细胞、原生质体等组织培养和诱导再生植株等过程，技术简单，不需要装备精良的实验室，常规育种工作者易于掌握，成本低，适宜普及；2）适用于多种单、双子叶植物局限性：1）该种方法只能在开花期才能进行，而且受体植物的受精过程及时间规律难以掌握；2）重复性差、成株转化率相对低种子浸泡转化法定义：浸泡转化法指将供试外植体如种子、胚、胚珠、子房、幼穗甚至幼苗等直接浸泡在外源DNA溶液中，利用渗透作用可将外源基因导入受体细胞并得到整合与表达的一种转化方法。转化原理浸泡转化是利用细胞自身的物质运转系统将外源DNA直接导入受体细胞。将外源DNA吸入植物细胞的途径有：通过细胞间隙与胞间连丝组成的网络化运输系统可以将外源DNA运输到每个细胞；通过内吞作用将外源DNA摄入细胞内；通过传递细胞的膜透性的改变为大分子物质透过细胞提供机会基本步骤及其应用浸泡转化法的基本步骤：外源DNA的制备；具有生活能力种子的获得及浸泡处理；在浸泡液中加入外源DNA；种子培养、发芽及抗性鉴定。优缺点01优点：种子浸泡转化法是植物转基因技术中最简单、快捷、便宜的一种转化方法，不需要昂贵的仪器设备和复杂的组织培养技术，可以进行大批量的受体转化工作，并且容易推广普及；02局限性：转化率低，重复性差03第三节园艺植物转化植株的鉴定外源