细胞培养基本方法复苏换液传代冻存.ppt

关于细胞培养基本方法复苏换液传代冻存*第1页，共31页，星期日，2025年，2月5日*一原代培养（略）第2页，共31页，星期日，2025年，2月5日*二.传代培养准备及注意事项换液传代冻存复苏MTT第3页，共31页，星期日，2025年，2月5日*准备事项

紫外灯照射细胞室30分钟,风机运行10分钟后方可进入实验室.穿专用的口罩,帽子,拖鞋,工作衣等.带手套,并用酒精擦拭之.准备好实验必需用品.超净工作台内操作前用酒精棉球擦拭台面.超净工作台内操作完成后，要用酒精棉球擦拭台面,除了酒精灯,镊子,试管架等物品外,其他都要拿出工作台外.紫外灯照射30分钟.第4页，共31页，星期日，2025年，2月5日*换液

把细胞培养瓶从培养箱中拿出,拧紧盖子;观察瓶内培养基的颜色,是否浑浊等;放在倒置显微镜下观察细胞生长状况。放入超净工作台内,点燃酒精灯,拿培养瓶口在酒精灯火焰上转两圈以上,至少三秒.取下盖子,烧瓶口;倒掉培养基,烧瓶口;拿出PBS液瓶子,烧瓶口和镊子;用镊子将塞子取出,烧瓶口（至少10圈）。第5页，共31页，星期日，2025年，2月5日*6.用吸管吸取3ml的PBS，打入培养瓶内。烧培养瓶口，来回晃动PBS100次后到掉PBS。重复此操作一次。7.拿出培养基瓶子，烧瓶口和镊子；用镊子将塞子取出，烧瓶口（至少10圈）。8.用吸管吸取5ml-8ml的培养基打入培养瓶内，烧瓶口，镊子和盖子；9.盖上盖子，倒置显微镜下观察，之后标明名称和日期，酒精棉球擦瓶口和瓶身，放入培养箱内即可。注意：1.打开培养箱时尽量不要说话；2.步骤9中培养瓶放入培养箱时，应把盖子拧开少许。第6页，共31页，星期日，2025年，2月5日*传代1.把细胞培养瓶从培养箱中拿出，拧紧盖子；2.观察瓶内培养基的颜色，是否浑浊等；放在倒置显微镜下观察细胞生长状况。3.放入超净工作台内，点燃酒精灯，拿培养瓶口在酒精灯火焰上转两圈以上，至少三秒。4.取下盖子，烧瓶口；倒掉培养基，烧瓶口；5.拿出PBS瓶子，烧瓶口和镊子；用镊子将塞子取出，烧瓶口（至少10圈）。第7页，共31页，星期日，2025年，2月5日*6.用吸管吸取3ml的PBS，打入培养瓶内。烧培养瓶口，来回晃动PBS100次后到掉PBS。重复此操作一次。7.拿出胰酶瓶子，烧瓶口和镊子；用镊子将塞子取出，烧瓶口（至少10圈）。8.用吸管吸取1ml的胰酶，打入培养瓶内，烧培养瓶口和盖子，盖上盖子；9.拿出工作台外，在倒置显微镜下观察细胞，然后用酒精棉球擦瓶口及瓶身，放入培养箱内；5分钟后取出；第8页，共31页，星期日，2025年，2月5日*10.在倒置显微镜下观察细胞的消化情况。若细胞变成单个圆形，则可进行传代。11.拿到工作台内，烧瓶口，取下盖子，烧瓶口。用吸管吸出胰酶，烧瓶口。12.拿出培养基瓶子，烧瓶口和镊子；用镊子将塞子取出，烧瓶口（至少10圈）。13.用吸管吸取5ml的培养基打入培养瓶内，用吸管吹打成单个细胞悬液。计数，分装即可。第9页，共31页，星期日，2025年，2月5日*冻存1.把细胞培养瓶从培养箱中拿出，拧紧盖子；2.观察瓶内培养基的颜色，是否浑浊等；放在倒置显微镜下观察细胞生长状况。3.放入超净工作台内，点燃酒精灯，拿培养瓶口在酒精灯火焰上转两圈以上，至少三秒。4.取下盖子，烧瓶口；倒掉培养基，烧瓶口；5.拿出PBS瓶子，烧瓶口和镊子；用镊子将塞子取出，烧瓶口（至少10圈）。第10页，共31页，星期日，2025年，2月5日*6.用吸管吸取3ml的PBS，打入培养瓶内。烧培养瓶口，来回晃动PBS100次后到掉PBS。重复此操作一次。7.拿出胰酶瓶子，烧瓶口和镊子；用镊子将塞子取出，烧瓶口（至少10圈）。8.用吸管吸取1ml的胰酶，打入培养瓶内，烧培养瓶口和盖子，盖上盖子；9.拿出工作台外，在倒置显微镜下观察细胞，然后用酒精棉球擦瓶口及瓶身，放入培养箱内；5分钟后取出；10.在倒置显微镜下观察细胞的消化情况。若细胞变成单个圆形，则可进行传代。第11页，共31页，星期日，2025年，2月5日*11.拿到工作台内，烧瓶口，取下盖子，烧瓶口。用吸管吸出胰酶，烧瓶口。12.拿出培养基瓶子，烧瓶口和镊子；用镊子将塞子取出，烧瓶口（至少10圈）。