载脂蛋白a测定授课郭杰单位鹤壁讲解.ppt

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BiochemistryLaboratoryOnlineCourse鹤壁职业技术学院HEBIPOLYTECHNIC载脂蛋白（a）测定授课教师：郭杰单位：鹤壁职业技术学院目录实验目的1重点、难点2实验原理3试剂和器材4实验步骤5误差分析及临床意义6实验目的1、掌握载脂蛋白测定的原理、方法和临床意义。2、学会误差分析酶联免疫吸附测载脂蛋白的原理、方法及基本仪器的规范操作误差分析重点难点重点和难点实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人载脂蛋白A1(Apo-A1)水平。用纯化的A1(Apo-A1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入Apo-A1，再与HRP标记的载脂蛋白A1(Apo-A1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。主要试剂apoa试剂盒校准液蒸馏水主要器材采血器材微量加样器吸量管恒温水浴箱酶标仪试剂和器材制备合格样本第一步实验过程第二步标准曲线第三步计算第四步实验步骤第一步用真空负压管采血，离心，待用第二步待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。第二步酶标板置4℃，包被过夜。第二步洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。第二步阴性对照孔每孔加入PBS50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。第二步酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。第二步洗板，阴性对照孔每孔加入PBS50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。第二步每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液100μl。酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。第二步洗板，阴性对照孔每孔加入PBS50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。第二步每孔加TMB显色液100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。每孔加100μl2mol/LH2SO4终止反应。第二步分别测450nm吸光值W1和630nm吸光值W2，最终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。第三步以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，第四步计算把样品的OD值代入标准曲线算出样品浓度。参考范围:ApoAI：1.00～1.50g/L。实验室测得结果不正常：检验者操作不规范造成临床意义临床检测结果不正常：患者生理或病理原因造成误差分析和临床意义ApoAI是HDL的主要结构蛋白，ApoB是LDL的主要结构蛋白，因此，ApoAI和ApoB可直接反映HDL和LDL的含量。在某些病理情况下，ApoAI与HDL和ApoB与LDL并非成正相关，因此，同时测定载脂蛋白及脂蛋白HDL和LDL对病理发生状态的分析很有帮助。冠心病、肾病综合征和糖尿病等都有ApoAI下降和ApoB升高。临床上常将ApoAI和ApoB比值作为冠心病的危险指标。临床意义1.微量移液器使用不规范2.吸量管使用不规范误差分析规范书写实验报告.作业模板来自于*量筒生物化学检验在线课程

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