细胞拆合课件.pptVIP

*細胞質工程又叫細胞拆合工程。*核質體（karyoplast）：細胞經細胞鬆弛素處理後，排出的細胞核帶有少量細胞質，並包有一層質膜，這種細胞核稱為核質體，又稱小細胞(minicell)。*線粒體的裝配，集中在其內膜變化的研究。用內膜脂質和內膜蛋白質，可以合成一些閉合囊泡，具有合成ATP的功能，只是在形態取向上，似乎是翻向外面的線粒體內膜囊泡，即“內翻外”囊泡。細胞膜的装配，已能在适当条件下，使红细胞的空壳或从细菌中获得的去除细胞质的单位膜小泡，重新溶解、分级，重新组合而形成具钠、钾泵性质、具电子传递和磷酸化生物合成等功能的膜结构。

*童第周於1979年逝世。*朱作言在1986年培育出首批快速生長2.3—4.3倍的转基因鲤、鲫和泥鳅，并提出转基因鱼模型理论和克隆纯合转基因鱼品系对策。?細胞拆合真核細胞是由細胞核和細胞質兩大部分組成的，細胞的正常生命活動都是在這兩部分密切配合下進行的，兩部分間有一定的相互關係，為了探明這種相互關係的機理，學者們創建了細胞拆合技術。物理法化學法根據使用方法的不同，細胞拆合可以分為以下兩種類型：所謂細胞拆合，就是把核與質分離開來，然後把不同來源的細胞質和細胞核相互配合，形成核質雜交細胞。第一節?物理法最早使用的核質分離技術是用機械的方法或短波光把細胞核去掉。例如用微玻璃針或微吸管將原生動物或魚類、兩栖類甚至哺乳動物的卵母細胞的細胞核去掉。還可使用紫外線或鐳射把細胞核破壞掉,形成去核的胞質體，然後用微吸管吸入其他細胞核，組成新的雜交細胞，進行培養實驗。核移植操作示意圖核移植操作流程圖兩栖類的核移植第二節?化學法細胞鬆弛素B(cytochalasinB)有破壞微絲的作用。1967年Carter發現，細胞鬆弛素B能誘發體外培養的小鼠細胞排核。至20世紀70年代初，Prescott用細胞鬆弛素B處理哺乳類細胞，並結合離心技術，可將細胞分拆為核體(karyoplast)和胞質體(cytoplast)兩部分。利用這種方法所得的胞質體，純度可達90％以上，一次處理可獲得較大量的胞質體。由於核體外表包有1層細胞膜和少量胞漿，因而也稱為小細胞(minicell)。在PEG或仙臺病毒的介導下，核體可同另一胞質體融合，形成重組細胞(reconstitutedcell)。重組細胞亦能合成RNA和進行細胞分裂。為了把重組細胞與未去核的細胞區別開來，應先進行標記。將準備制取核體的細胞，用3H-嘧啶核苷標記核；而準備制取胞質體的細胞用小乳膠粒(Φ0.5μm)標記細胞質(乳膠粒可被吞噬進入細胞質)。真正融合的重組細胞，核為3H標記，細胞質中含有乳膠粒。大體操作流程細胞（制取核體用）細胞（制取胞質體用）3H-嘧啶核苷標記————小乳膠粒標記雜交細胞細胞鬆弛素B細胞鬆弛素B離心離心核體胞質體融合細胞器的裝配細胞器的拆合是離體的裝配過程。第三節?細胞拆合工程的內容線粒體的裝配細胞膜的裝配細胞拆合工程包括3個方面的內容：細胞的裝配利用顯微操作器進行細胞各部分的解剖，細胞各部分物質的抽取和移植、注入各物質、測量微電位的變化等。細胞質雜種細胞的研究胞質雜種細胞是深入研究細胞質作用的重要樣品，是不同種系之間的一種真正的新型細胞，在適宜條件下能成功地生存下去。在植物中已有煙草的細胞質雜種個體。

1950年，美國科學家RobertBriggs和同事ThomasKing從豹蛙胚胎中取出一個細胞，用玻璃微針管取出其中的細胞核，再成功地將之注入到去核的卵細胞中。兩年後，兩人完善了移植技術，在豹蛙的一系列實驗中40%的重組卵發育成胚胎、蝌蚪和幼蛙，這是人類第一次培養出的細胞核移植蛙，即克隆蛙。他們的研究結果發表在1952年3月出版的美國《國家科學院院刊》上。童第周：《魚類細胞核移植》《鯉魚細胞核和鯽魚細胞質配合而成的核質雜種魚》*細胞質工程又叫細胞拆合工程。*核質體（karyoplast）：細胞經細胞鬆弛素處理後，排出的細胞核帶有少量細胞質，並包有一層質膜，這種細胞核稱為核質體，又稱小細胞(minicell)。*線粒體的裝配，集中在其內膜變化的研究。用內膜脂質和內膜蛋白質，可以合成一些閉合囊泡，具有合成ATP的功能，只是在形態取向上，似乎是翻向外面的線粒體內膜囊泡，即“內翻外”囊泡。細胞膜的装配，已能在适当条件下，使红细胞的空壳或从细菌中获得的去除细胞质的单位膜小泡，重新溶解、分级，重新组合而形成具钠、钾泵性质、具电子传递和磷酸化生物合成等功能的膜结构。

*童第周於1979年逝世。*朱作言在1986年