《病原生物与免疫学》第11章固相膜免疫分析技术.pptx

1.HRP催化的反应式为DH2+H2O2→D+2H2O,何者习惯上被称为底物()

A.DH2B.H2O2C.DD.H2O

2.OPD经与HRP反应后,再用H2SO4终止反应后呈()

A.橙黄色B.棕黄色C.黄色D.蓝色

3、目前ELISA中应用最广泛的底物是

A.OPDB.TMBC.5-ASA

D.ABTS（）;4.ELISA双抗体夹心法是()

A.酶标记特异抗体用于抗原的检测

B.先将待测抗原包被于固相载体

C.标记一种抗体可检测多种抗原

D.能用于半抗原的测定

E.属竞争结合测定

5.捕获法主要用于何种物质的测定A.IgMB.IgGC.IgAD.IgD

();6、下列哪种方法用一种标记物可检测多种被测物()

A.ELISA双抗体夹心法B.ELISA竞争法

C.ELISA间接法D.ELISA捕获法

E.放射免疫测定法

7.关于ELISA竟争法,正确的是()

A.用于检测抗原

B.被测物与酶标记物的免疫活性各不相同

C.被测物多则标记物被结合的机会少

D.待测管的颜色比参照管的淡表示被测物量少

E.结合于固相的酶标抗原量与样品中被测抗原量成正比

;1.每个亲和素能结合多少个分子的生物素

A.1B.2C.3D.4

2.生物素分子中与亲和素结合的主要部位是()

A.噻吩环B.咪唑酮环C.苯环

D.羰基E.-NH-

3.在用生物素标记酶时,酶活性会降低的是

A.HRPB.葡萄糖氧化酶

C.β-GalD.AP();第十一章;掌握：免疫印迹试验

熟悉：胶体金免疫技术的方法学种类与原理

了解：胶体金与免疫金的制备、其他膜载体免疫分析技术;一概述

二免疫层析试验

三免疫渗滤试验

四斑点酶联免疫吸附试验

五免疫印迹试验

六影响固相膜免疫试验的主要因素

七固相膜免疫分析技术的临床应用

;;第二节免疫层析试验

;第二节免疫层析试验

;二、测定模式

（一）胶体金免疫层析试验;;;三技术要点

操作要点：

（1）将试剂条标记线一端浸入待测标本中2-5s,或在标本加样处加一定量待检标本,平放于水平桌面上

（2）在5-20分钟内观察结果

结果判断阴性:1条棕红色指控条带

阳性:出现2条棕红色条带

无棕红色条带出现为试剂失效

;2技术??点

（1）胶体金溶液的PH值

（2）蛋白质最适标记量

（3）标记过程

（4）金标记物的纯化

3注意事项

4免疫金的保存;第三节免疫渗滤试验;;技术要点：;;技术要点：

1、抗原包被膜

2、抗原抗体反应

3、确定酶结合物最佳稀释度

4、显色反应;方法学评价：

1、NC吸附力强，灵敏度较ELISA高

6～8倍；

2、节约试剂；

3、操作简便不需特殊仪器设备

4、吸附抗原（抗体）或已有结果的NC膜可长期保存，不影响期活性。;第五节.免疫印迹试验

（immunoblottest,IBT）;二Westernblot技术要点:

1.抗原印迹与包被

①（SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳）

②电转移

2.抗原抗体反应

3.检测

;SDS

抗原等蛋白样品经SDS处理后带阴电荷，在聚丙烯胺凝胶中从阴极向阳泳动，分子量越小，泳动速度就越快。此阶段分离效果肉眼不可见（只有在染色后才显出电泳区带）;;电转移

将在凝胶中已经分离的条带转移至硝酸纤维素膜上，选用低电压（100V）和大电流（1-2A），通电45min转移即可完成。此分阶段分离的蛋白质条带肉眼仍不可见。

;酶免疫定位

将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用后，加入能形成不溶性显色物的酶反应底物，使区带染色。阳性反应的条带清晰可辨，并可根据SDS加入的分子量标准，确定各组分的分子量。

;;;（三）方法学评价：

1、特异性强

2、吸附蛋白能力强

3、可同时检测多种抗体

4、膜条的重复检测应用;第六节影响固相膜免疫试验的主要因素

一试剂方面

二标本方面

三实验过程

第七节固相膜免疫分析技术的临床应用

激素、自身免疫性疾