动物细胞与组织培养技术课件.pptxVIP

動物細胞與組織培養技術;第一節概述;

就培養物而言，體外培養分為：

組織培養

細胞培養

器官培養;2、原代培養(PrimaryCulture)：亦稱初代培養，指直接從機體取出的細胞或組織進行第一次培養的過程。

3．繼代培養（SecondaryCulture）：亦稱傳代培養，從原代培養的細胞繼續轉接培養稱繼代培養.

4.細胞系(cellline)：由原代細胞培養後經初步純化，獲得的以一種細胞為主、能在體外長期生存的不均一的細胞群體。若傳代次數有限，不能連續培養的稱為有限細胞系(finitecellline)，如可以連續培養，稱為連續細胞系(continuouscellline)。

5.細胞株(cellstrain)：細胞株是用單細胞分離培養或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。;二、動物細胞培養的發展歷史;1925年，Maximow採用雙蓋片法。

1934年，Gey和Lewis用旋轉管培養了許多細胞系。相繼，人們設計了多種類型的培養瓶。

1948年，Sanford創立了單層細胞培養法，建立了各種細胞系。他還創建了單個細胞培養方法。

1951年，Pomerat設計了細胞培養灌流小室技術，使細胞生活在不斷更新的培養液環境中，便於做細胞代謝等研究

1951年，厄爾（Earle）發明了體外培養動物細胞的人工合成培養基。

;1952年．Gey建立了第一個人體細胞系（人體宮頸癌Hela細胞系）。

20世紀70年代，快速發展第一次高潮：

1960年，Barski等人在兩種不同類型的細胞混合培養物中發現有自發的融合細胞。

1962年，岡田善雄又發現了已滅活的仙臺病毒可以誘發體內艾氏腹水瘤細胞和非惡性細胞融合。且融合細胞染色體丟失，惡性特徵受到抑制。

1975年：淋巴細胞雜交瘤技術製備單抗。

1981年，美國FDA批准第一個利用動物細胞生產單克隆抗體診斷試劑上市。;20世紀80年代，發展的第二次高潮：

基因重組技術開始應用於動物細胞，1984年，Genentech公司用重組CHO細胞表達Tpa,標誌著哺乳動物細胞表達系統的建立。隨後，許多外源蛋白基因相繼被轉染到動物細胞中，包括凝血因數、EPO、激肽釋放酶等。;二、動物細胞體外培養特點

動物細胞生長緩慢，培養時間長。

更易受微生物污染（包括細菌、真菌、病毒、支原體），需要防治污染問題。

對培養環境的適應性差，對環境極其敏感。包括PH值、溫度、剪切力

對營養要求高，除了氨基酸、維生素、鹽類、葡萄糖或半乳糖外，一般還需要血清。

動物細胞間主要以聚集體形式存在，大多需要貼附在載體表面才能生長。

原代細胞一般繁殖50代左右退化死亡。

總之，動物細胞培養對各方面的要求更高，培養難度更大。

;;平滑肌細胞;四、動物細胞的體外培養一般條件

;2、pH：最適為7.2～7.4

;3、氣體;;5、無菌

培養環境無毒和無菌是保證細胞生存的首要條件。當細胞放置於體外培養時，與體內相比細胞丟失了對微生物和有毒物的防禦能力，一旦被污染或自身代謝物質積累等，可導致細胞死亡。因此在進行培養中，保持細胞生存環境無污染、代謝物及時清除等，是維持細胞生存的基本條件。

;;（二）培養細胞的生長方式及形態;;體內外細胞的差異;;貼壁依賴型細胞;1、貼壁依賴型細胞

貼附:是大多數有機體細胞在體內

生存和生長發育的基本存在方式

含義：一是細胞之間相互接觸，二是細胞與細胞外基質結合。

單層附壁培養：指動物細胞培養中，大多細胞必須附著在固體表面生長，當細胞佈滿表面後即停止生長。;在體外按照培養細胞的形態不同，主要可分為以下幾類：成纖維細胞型、上皮型細胞、遊走型細胞、多形型細胞

（1）成纖維細胞型：

本型細胞的形態似在體內生長的成纖維細胞；

形態：長梭形，細胞在支持物表面呈梭形或不規則三角形生長，細胞核位於中央，胞質向外伸出2-3個長短不同的突起，中有卵圓形核.

生長特點：細胞一般並不緊靠相連；生長時呈放射狀、漩渦狀走向，細胞間間隙較大。

來源：由中胚層間充質組織起源的組織.如人胚肺細胞。

如：真正的成纖維細胞

心肌，平滑肌

;人的成纖維細胞;;大鼠血管平滑肌細胞;;（2）上皮型細胞

形態:扁平狀，不規則。

細胞貼壁後呈不規則多角形，中央有扁圓形核，細胞彼此緊密相連成單層細胞，呈現“鋪路石狀”。

生長特點:易相連成片

相靠—緊密相連—成薄層—鋪石狀

生長時呈膜狀移動，處於膜邊緣的細胞總與膜相連，很少脫離細胞群單獨行動。

來源:內胚層和外胚層。如皮膚、消化道、呼吸道、肺泡、消化腺上皮細胞，血管內皮細胞等。

Hela細胞呈現