动物细胞培养制药工艺课件.pptVIP

*2懸浮培養細胞在反應器內游離懸浮在培養液中生長的培養過程優點：操作簡單，培養條件相對均一，傳質和傳氧較好，容易放大培養。缺點：細胞體積小，密度低，培養病毒易失去標記而降低免疫能力。適用範圍：懸浮細胞，兼性貼壁細胞，雜交瘤借鑒微生物發酵理論和經驗，發揮動物細胞的特性*3微載體培養概念：細胞貼附於微載體上伸展和增殖，再懸浮於培養液中的培養過程。優點：細胞生長的環境均一，培養基利用率高，重複性好，減少了勞動強度，容易放大。兼具貼壁和懸浮培養的雙重優點微載體，多孔微載體應用：工業化生產干擾素、疫苗和尿激酶原。*4固定化培養概念：用物理、化學方法將細胞固定在載體介質上，然後進行懸浮培養。應用：貼壁依賴性和非貼壁依賴性細胞。優點：細胞密度高、抗剪切力和污染，生產首選方法共價交聯：雙功能試劑處理，細胞之間交聯。吸附：物理吸附使細胞貼附在固體載體表面。包埋：細胞包埋在載體內部。微囊法：親水半透膜把細胞包埋在微囊內。*4.4重組人紅細胞生成素生產工藝*一概述天然紅細胞生成素的發現與種類理化性質重組人紅細胞生成素及其臨床應用重組人紅細胞生成素表達研究*1天然紅細胞生成1890：現象，低氧壓下紅細胞增多1948：Bonsdorff和Jalavisto，提出紅細胞生成素（erythropoietin，EPO）。形式：hEPO-α及hEPO-β，二者氨基酸組成及順序相同，166aa，活性類似。糖基化及其含量不同：EPO-α含有較多的N-乙醯葡糖胺，總含糖量比EPO-β高。*2EPO的理化性質大小：166aa糖鏈占分子量的39%。糖基化程度與準確性對活性影響很大。pI4.2～4.6，對熱和pH變化相對穩定。動物細胞培養制藥工藝*4.1制藥動物細胞*一動物細胞的結構與功能動物細胞的結構與功能細胞膜細胞質細胞核沒有細胞壁亞細胞器*動物細胞培養的代謝特徵葡萄糖和穀氨醯氨：能量和合成代謝的前體。葡萄糖限制葡萄糖限制：通過增加穀氨醯氨消耗得以補償，反之通過增加穀氨醯氨消耗得以補償，反之亦然。葡萄糖代謝：糖酵解為主，，生成丙酮酸和乳酸，乳酸分泌到胞外並在培養液中積累。另一條途徑為TCA迴圈，徹底氧化產生CO2和水。一小部分為戊糖磷酸途徑，生成生成4、5、7碳糖和NADPH。中間產物進入脂肪酸代謝、核酸代謝和氨基酸代謝。葡萄糖代謝旺盛，產生大量乳酸，對細胞有毒性。*Gln代謝：脫氨、轉氨等作用，合成其他必需和非必需氨基酸。Gln氮源，Gln受限，增加其他氨基酸消耗以補償。離體動物細胞系，轉氨作用是主要代謝途徑。穀氨醯胺在脫氨酶的催化下，脫氨產生氨，對細胞有毒性。穀氨醯氨與丙酮酸發生轉氨作用，生成丙氨酸，進入培養液並積累。Gln能量：Glu轉化為α-酮戊二酸，進入TCA迴圈。流加葡萄糖或穀氨醯氨，控制整個代謝過程，避免有毒廢物的積累。*蛋白質糖基化與分泌表達蛋白質合成場所：粗糙內質網上的核糖體糖基化場所：內質網合成各種糖類，粗糙內質網腔內和高爾基體，加工修飾。不同細胞系糖基化特徵不同，選擇適宜細胞系。對於分泌型蛋白，分泌泡與細胞膜融合，釋放到胞外，完成了蛋白質的分泌表達。*二制藥動物細胞的種類目前用於制藥的動物細胞有4類：原代細胞系二倍體細胞系異倍體細胞系融合的或重組的工程細胞系*細胞系分類來源：原代細胞，傳代細胞。壽命：有限細胞系，無限細胞系。染色體數目：二倍體細胞系，異倍體細胞系。獲得方式：工程細胞系，癌變細胞系。生長特性：貼壁依賴型，非貼壁依賴型細胞系。*4.2動物細胞的生產特徵*一對培養條件要求嚴格動物細胞對周圍環境十分敏感無細胞壁保護，細胞膜直接接觸外界。物理化學因素：滲透壓、pH、離子濃度、剪切力等耐受力很弱，容易受傷害。與細菌和植物細胞相比，動物細胞培養條件要求嚴格地多。*1溫度哺乳動物細胞最佳培養溫度為37℃雞細胞為39℃～40℃；昆蟲類細胞為25℃～28℃。耐受溫度範圍較窄，35℃～37℃細胞受傷：39℃～40℃1小時，但能恢復。受傷嚴重：41℃～42℃，部分可恢復。死亡：43℃以上。*2氧氣動物細胞生長必須有氧氣，缺氧時不能生存。離體培養的氣體：含有5％CO2和95％空氣，其中氧濃度為中氧濃度為21％。高氧環境：O2濃度60%以上，對細胞毒性較大，抑制生長和增殖，出現染色體異常等現象。有時充以有時充以N2氣稀釋O2濃度。*3pH值低於6.8或超過7.6會對細胞產生嚴重影響甚至使細胞死亡。機體細胞的pH範圍為6～8，而且在血液和體液中，變化範