核酸技术课件.pptVIP

*核酸技術

TechnologyofNucleicAcid對遺傳分子核酸的結構與功能的闡明，用於研究核酸的工具酶的開發，由核酸的分子雜交性質建立起的一系列分析技術，使我們已經能夠按照自己的意願來擺佈和操作基因，去改變生命有機體的遺傳性狀，甚至製造出新的物種，以服務於人類。重組DNA技術使人類千百年的夢想變為了現實。一個夢想已成真生長激素基因注入小鼠受精卵中培育出了“碩鼠”1.DNA重組技術DNA重組技術是利用多種限制性內切酶和DNA連接酶等工具酶，以DNA為操作對象，在細胞外將一種外源DNA（來自原核或真核生物）和載體DNA重新組合連接（重組），形成重組DNA，然後將重組DNA轉入宿主細胞（如大腸桿菌等），使外源基因DNA在宿主細胞中隨宿主細胞的繁殖而增殖，並在宿主細胞中得到表達，最終獲得基因表達產物或改變生物原有的遺傳性狀。“基因工程”（geneengineering）或“分子克隆”（molecularcloning）。基因重組技術的兩個基本目的1.直接利用基因主導生長的基因、作物的抗性基因、基因診斷、基因治療、指紋圖譜等2.利用基因的表達產物疫苗、藥物、組織啟動物、生長因數、珍稀蛋白等50年來，核酸酶學的進步為DNA的分析與鑒定提供了有力的工具。主要的核酸酶有：DNA聚合酶（DNApolymerase）klenow片段，Taq酶限制性核酸內切酶（restrictionendonuclease）逆轉錄酶（Reversetranscriptase）S1核酸酶（S1nuclease）連接酶（Ligase）拓撲異構酶（Topoisomerase）等核酸酶學限制性核酸內切酶——一把神奇的“手術刀”具有內切和甲基化兩種功能能夠識別外源的核酸並將它切除有特異的識別位點，通常為4-8對堿基的旋轉對稱結構在其切口處留下黏性末端（stickyend）——具有互補序列的單股鏈，或者平頭末端（bluntend）有3種類型，II型為主例如：EcoRI屬種品系排序限制性內切酶（有專一的切點並常在切口處留下黏性末端）目的基因克隆的技術路線獲得目的基因選擇合適的可以攜帶目的基因的載體把目的基因插入到載體中去，得到重組載體將重組載體導入宿主細胞進行克隆（通過無性繁殖，隨著宿主目的基因也得以擴增）對重組的克隆進行篩選使重組的宿主細胞大規模的表達目的基因黏性末端（如質粒，噬菌體等）（如細菌）目的基因克隆的技術路線利用表型特性，核酸雜交以及免疫化學等方法對克隆進行篩選目的基因的製備直接從染色體中分離人工合成逆轉錄合成cDNAcDNA文庫：用細胞全部mRNA經反轉錄製備全套cDNA後建庫。構建基因文庫PCR擴增質粒是可以獨立複製並在細菌之間轉移的遺傳單位，質粒還能賦予宿主菌某種表型其他的基因載體還有如：噬菌體，病毒等目的基因的載體plasmidDNAGenomicDNA含有目的基因的重組宿主細胞（如細菌）可以通過規模化的基因工程生產目的蛋白（如激素）古埃及一具木乃伊的一個DNA片段已經得到克隆打開了人們窺探過去的窗戶2.基因鑒定聚合酶連鎖反應（PCR,DNApolymerasechainreaction）目的基因可以通過以下系統在試管中得以大規模擴增一個溫度和時間可以控制的反應體系含有雙鏈DNA範本耐熱的DNA聚合酶（如Taq酶）一對設計適當的RNA引物，dNTP原料，過量經“變性---退火---延伸”多次迴圈使目的DNA得以擴增DNA核苷酸序列分析Sanger雙去氧鏈終止法利用一個標記的（如用同位素標記），特異的，單股DNA或RNA片段——探針（probe），可以：研究DNA之間的親緣關係；發現基因的缺失或突變；測定某種遺傳資訊的量；鑒定某種基因基因治療等分子雜交（Molecul