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*○STS的種類⑴表達序列標記(expressedsequencetag,EST),是從cDNA克隆中獲得的短序列。EST是獲得基因序列的簡捷方法。⑵簡單序列長度多態性(SSLP,小衛星和微衛星)。⑶隨機基因組序列,從克隆的基因組DNA中隨機測序獲得。*
第三節??基因定位方法動物有幾十條染色體,有幾萬個基因,平均每條染色體有上千個基因。確定基因在哪一條染色體的哪一個座位上就是基因定位。 將定位的基因標注在染色體上就可得到基因圖(genemap)基因定位與基因組作圖和基因克隆關係密切:基因定位後可以作為一個界標;確定基因的位置後就可按圖去分離克隆基因不同生物的基因定位方法不完全相同。基因定位的方法隨著遺傳學的發展而進步。*一、品質性狀的基因定位品質性狀——從表型上可以明顯區分為不同類型的性狀。(一)家系分析定位法性連鎖分析是最常用的方法。哺乳動物中只出現在雄性的性狀,控制該性狀的基因在Y染色體上。性狀出現隔代交叉遺傳、且雄性出現比例高於雌性,則控制該性狀的基因在Y染色體上。(二)遺傳重組值定位法摩爾根提出的方法,根據基因間的重組值與遺傳距離成正比的原理,採用兩點測交和三點測交的方法進行基因定位。*
(三)體細胞雜交定位法不同物種細胞融合後,雜種細胞會出現排除某一親本染色體的現象,在人鼠雜種細胞常專一性地排除人的染色體。可以製備含一條(或少數幾條)人染色體的雜種細胞。○定位測驗法鑒別雜種細胞中保留了哪些人染色體,測定雜種細胞產生了哪些基因產物,經分析可將基因定位在哪一條染色體上。*(四)原位雜交定位 將待定位基因的特定DNA序列或該基因轉錄的RNA作為探針,在標記了放射性同位素或非放射性化學物質後,與變性後的染色體DNA雜交,該探針就會同染色體DNA與其互補的序列結合成為雙鏈,通過放射自顯影或顯色技術,就可確定探針(即待定基因)在染色體上的位置。**??動物基因組學基礎第一節????動物遺傳標記一遺傳標記的概念及其發展(一)遺傳標記的概念遺傳標記是指能夠用以區別生物個體或群體及其特定基因型、並能穩定遺傳的物質標誌。遺傳標記是一些等位基因或遺傳物質,能在生物體上以各種形式表現出各種變異。遺傳標記的概念經歷了從宏觀到微觀、從外部到內部、從蛋白質到DNA的發展過程。*
(二)遺傳標記概念的發展□形態學標記能用肉眼觀察和識別的外部性狀。例如,動物的毛色、角形、耳型、體型、外貌等。此法簡單直觀,但標記數目少、多態性低、易受環境影響。□細胞遺傳標記主要是指染色體核型(染色體的數目、大小、隨體、著絲粒位置、核仁組織區等)、帶型和數量的變異。此法能反映出染色體結構和數目的多態性,但由於這些變異往往帶來有害的表型效應,生物難以忍受。*
□免疫遺傳標記以動物的免疫學特徵為標記,主要是紅細胞抗原多態性和白細胞抗原多態性。·紅細胞抗原多態性——血型,以細胞表面的抗原而定·白細胞抗原多態性——主要組織相容性複合體(MHC),以白細胞表面的抗原而定。□生化遺傳標記(蛋白質多態性標記) 同一種動物中,具有相同功能的蛋白質存在兩種以上的變異體,有些可以用電泳方法區分其中的差異。*
□??分子遺傳標記○分子遺傳標記是以DNA多態性為基礎的遺傳標記,又稱DNA分子標記或多態性DNA標記。○自20世紀70年代以來,隨著分子生物學的發展,相繼建立了多種分子遺傳標記檢測技術,例如,RFLP、VNTR、RAPD、AFLP、SNP等。○分子遺傳標記的特點:遺傳多態性高;檢測方法簡單快捷;遺傳共顯性,能分離出等位基因的三種基因型。*
二、分子遺傳標記(一)限制性片段長度多態性(restictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP)○RFLPRFLP是1980年建立的第一代分子遺傳標記。原理:用限制性內切酶切割不同個體的DNA時,如果存在酶切位點的變化,就會產生長度不同的DNA片段,電泳後用克隆探針檢測時,就會出現泳動行為的改變。基本過程:取得DNA樣本——酶切——電泳——轉移至硝酸纖維膜上——
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