植物组织与细胞培养技术.ppt

选择适宜的外植体及最佳培养基提高转管率加抗氧化剂（抗坏血酸、PVP、牛血清白蛋白等）加活性炭0.1-0.5%活性炭褐变的防止措施（三）玻璃化（Vitrification）组培苗外观形态呈半透明状的生长异常现象叶、嫩梢呈水晶透明或半透明水浸状；矮小肿胀失绿；叶片皱缩卷曲、脆弱易碎叶表无角质层蜡质，没有功能性气孔，不具有栅栏组织，仅有海绵组织体内含水量高，干物质低，光合能力和酶活性降低，组织畸形，器官功能不全，分化能力降低生根困难，很难继续培养和移栽成活激素：细胞分裂素浓度、比例过高琼脂：琼脂浓度低（培养基太“稀”）温度：高温光照时间：光照不足通风条件：气体交换不良离子水平：无机离子种类及比例不当主要原因提高蔗糖和琼脂浓度（提高渗透势）适当降低细胞分裂素浓度，增加生长素比例适当增加Ca、Mg、Mn、K、P、Fe、Cu，降低N（铵态氮）和Cl（重选或改良培养基配方）增加自然光照，1000-1800lx，控制光照时间8-12h适温生长使用透气性好的封口膜预防措施试管苗的驯化与移栽一、试管苗的特点1、试管苗的生态环境⑴高、恒温试管苗整个生长过程中采用的是恒温培养，温差很小。并且温度一般控制在25+2℃甚至更高外界环境条件温度不断变化，其调节由太阳辐射决定，温差很大（季节、日夜），而且一般不会达到25+2℃。组织培养出来的苗通称试管苗或组培苗生长素主要被用于诱导愈伤组织形成，促进细胞脱分化，诱导根的分化和促进细胞伸长生长。01天然的生长素热稳定性差，高温高压或受光条件易被破坏。在植物体内也易受到体内酶的分解。组织培养中常用人工合成的生长素类物质02IAA（indole-3-aceticacid）（?吲哚乙酸）、IBA（?吲哚丁酸）、NAA（萘乙酸）、2,4-D03配成1mg/ml的溶液贮于冰箱中04（１）生长素类(auxin)IAA--天然生长素，亦可人工合成，其活力较低，是生长素中活力最弱的激素，对器官形成的副作用小，高温高压易被破坏，受光也易分解NAA--启动能力比IAA高出3-4倍，可大批量人工合成，耐高温高压，不易被分解破坏，应用较普遍IBA--促进发根能力较强NAA和IBA广泛用于生根，并与细胞分裂素互作促进芽的增殖和生长。2,4-D--启动能力比IAA高10倍，特别是促进愈伤组织的形成，同时强烈抑制芽的形成，影响器官的发育。适宜的用量范围较狭窄，过量常有毒效应腺嘌吟的衍生物，包括6-BA、Kt、Zt等。其中Zt活性最强，但非常昂贵，常用的是6-BA。作用：诱导芽的分化促进侧芽萌发生长促进细胞分裂与扩大（茎增粗），抑制根的分化，延缓衰老多用于诱导不定芽的分化、芽的增殖。（２）细胞分裂素类(cytokinin，CTK)激素配比模式生长素/细胞分裂素的比值决定分化发育的方向，是愈伤组织、长根还是长芽。生长素/细胞分裂素高利于根的形成适中愈伤组织低有利于芽的形成有20多种，培养基中添加的是GA3，一般极少使用01作用02打破休眠，促进种子、块茎、鳞茎等提前萌发。03促进幼苗茎的伸长生长04促进胚发育成小植株；05离体培养下，还与生长素协调作用对形成层分化有影响06当生长素／赤霉素比值高，木质部分化，比值低，韧皮部分化。07在器官形成后，添加赤霉素有时可促进器官或胚状体的生长08（３）赤霉素（gibberellicacid）GrowthmediumisoptimisedforregenerationofplantletsNosucrose(0%)Sucrosereducedto1%Sucroseincreasedto5%Theexplantiscompletelycoveredwithgreenshoots,androotsaredevelopingonthelowersurfaceVeryfewshootshavedevelopedontheexplant.Norootsandnocallus.Shootsdevelopedonedgesofuppersurface,andsomerootdevelopmenthasoccuredShootshavedevelopedoverthesurfaceoftheexplant,alongwithrootsfromthelowersurface.Theresultiscomparablewiththecontrol