3 初级分离课件.ppt

***浓度高时，Γ达到恒定值，3*10-10mol/cm2SDS分子量为272.38，CMC为1L中2.7g--5.45g******浓度不宜超过临界胶束浓度，但也不能太低，使泡沫层不稳定，太高则使分离效率下降。*****************************如Ca2+和Mg2+能与羧基结合，Mn2+和Zn2+能与羧基、含氮化合物以及杂环化合物结合。*******促使液体表面收缩的力叫做表面张力。水是有许许多多的水分子组成的。水表面的水分子紧紧的靠拢在一起，有一种相互吸引的力，这种力就叫做水的表面张力。水的表面張力約71.96達因/釐米，而1%的肥皂水約29.11達因/釐米，5%的肥皂水約28.26達因/釐米，由此可知，當加入肥皂水，降低了水的表面張力，導致針下沈。*3初级分离3初级分离3初级分离三影响泡沫分离的因素A料液性质溶液的pH值、离子强度和其他添加剂B表面活性剂浓度不宜超过临界胶束浓度C操作条件温度应达到表面活性剂的起泡温度气体流速D泡沫柱3初级分离四泡沫分离的应用A．细胞的收集或去除B.蛋白质和酶的分离浓缩C.中药有效成分的分离浓缩3初级分离3初级分离3初级分离3初级分离1常用的蛋白质沉淀方法有哪些？2比较Ks盐析法和β盐析法3影响盐析的主要因素有哪些？4用乙醇沉淀蛋白质时应注意哪些事项？5泡沫分离定义、原理和操作过程影响因素6P531、2思考题***********************3初级分离

3初级分离3.1.3等电点沉淀3初级分离定义：利用蛋白质在pH等于其等电点的溶液中溶解度下降的原理进行沉淀分级的方法称为等电点沉淀法（Isoelectricprecipitation）。操作条件：低离子强度；pH?pI。3初级分离一般适用于疏水性较大的蛋白质（如酪蛋白），而对于亲水性很强的蛋白质（如明胶）则不太适用，故其不如盐析沉淀法应用广泛。3初级分离特点：优点：很多蛋白质的等电点都在偏酸性范围内,而无机酸价格低廉，为食品允许，可直接进行其他纯化;无需后续的脱盐操作。缺点：1容易引起目标蛋白质的失活；2不能获得高的回收率。3初级分离3.1.4有机溶剂沉淀3初级分离定义：向蛋白质溶液中加入丙酮或乙醇等水溶性有机溶剂，造成蛋白质分子表面水化程度降低，从而发生沉淀的方法。操作条件：低离子强度；0.01~0.05mol/L等电点附近。3初级分离有机溶剂中的蛋白质沉淀3初级分离特点：优点：分辨率高于盐析；有机溶剂易挥发，无残留，产品清洁；有机溶剂密度较低，易于沉淀分离；不需后续脱盐处理。缺点：易引起蛋白质变性，须在低温下进行；成本较高。3初级分离有机溶剂沉淀原理破坏键空间结构变形疏水基团暴露形成疏水层水膜不再存在自由羧基和氨基包在内部颗粒表面静电排斥作用消失蛋白质沉淀3初级分离乙醇沉淀蛋白质应控制好的有关参数：⑴温度：温度越低，沉淀越完全。－10℃⑵乙醇浓度：乙醇浓度上升，蛋白质溶解度下降。⑶pH值：pI⑷蛋白质浓度：应避免使用很稀的浓度，蛋白质在高浓度下比较稳定。3初级分离例如：3初级分离3.1.5其他沉淀法3初级分离一、热沉淀

（Thermalprecipitation)定义：利用在较高温度下，热稳定性差的蛋白质发生变性沉淀的现象，分离纯化热稳定性高的目标蛋白的方法。3初级分离操作条件：调节pH；加入有机溶剂。特点：是一种变性分离法，带有冒险性，需对目标蛋白和共存杂蛋白的热稳定性有充分了解。3初级分离二、特殊沉淀剂法非离子型聚合物沉淀机理：空间排阻常用聚合物：聚乙二醇(PEG）3初级分离聚电解质沉淀机理：与絮凝类似，在蛋白质间起架桥作用，同时兼有盐析作用。应用：主要用于酶和食品蛋白的回收。常用的聚电解质有酸性多糖和羧甲基纤维素等。3初级分离某些多价金属离子沉淀机理：可与蛋白质分子上的某些残基发生作用而使蛋白质沉淀。优点：可使浓度很低的蛋白质沉淀；沉淀后金属离子可用离子交换树脂或螯合剂除去。3初级分离3.2泡沫分