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血液和尿液中239种合成大麻素及代谢物的液相色谱-高分辨质谱检验方法

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SF/T0167—2024

2)内标工作溶液：1pg/mL的AKB48-d,和JWH-018N-(4-hydroxypentyl)metabolite-d;混

合内标溶液由符合5.1e)1)的内标储备溶液用甲醇稀释得到，50ng/mL的内标工作溶液用乙腈稀释得到。密封，置于冰箱中冷冻保存，有效期3个月。

5.2仪器和设备

仪器和设备及要求如下。

a)液相色谱-高分辨质谱仪：配有电喷雾离子源(ESD。

b)电子天平：分度值≤0.1mg。

c)旋涡混合器。

d)聚四氟乙烯滤膜：0.22μ.

e)离心机。

f)移液器。

6定性分析

6.1样品前处理

6.1.1检材样品

6.1.1.1血液样品

取血液100L,加入内标工作溶液900L,涡旋混匀，12000r/min离心5min,取上清液，经滤膜过滤，滤液直接供液相色谱-高分辨质谱仪分析。

6.1.1.2尿液样品

取尿液100μL,加入β-葡萄糖醛苷酸酶10μ,涡旋混匀，在55℃下孵育30min,酶解后的样品取出冷却，加入内标工作溶液900μL,涡旋混匀，12000r/min离心5min。取上清液，经滤膜过滤，滤液直接供液相色谱-高分辨质谱仪分析。

6.1.2空白样品

取空白血液(或尿液)100山作为空白样品，按6.1.1的方法，与检材样品平行操作。

6.1.3质控样品

取空白血液(或尿液)100μL,添加质控标准工作溶液10μL,配制成50ng/mL的质控样品，然后按6.1.1的方法，与检材样品平行操作。

6.1.4添加样品

取空白血液(或尿液)100pμL,添加标准物质工作溶液，配制成浓度相近的检材样品中出现的可疑合成大麻素及代谢物的添加样品，然后按6.1.1的方法，与检材样品平行操作。

6.2仪器检测

6.2.1仪器条件

6.2.1.1液相色谱条件

以下为参考条件，可根据不同品牌仪器等实际情况进行调整。

a)色谱柱：C18柱(100m×2.1mm,1.7μm)或其他等效柱。

b)流动相：流动相A为水(含0.1%甲酸),流动相B为甲醇(含0.1%甲酸):采用梯度洗脱，梯度洗脱程序见表1。

c)流速：0.4mL/min。

d)柱温：35℃。

e)自动进样器温度：4℃。

f)进样量：5μ。

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SF/T0167—2024

表1流动相梯度洗脱程序

时间min

流动相A

流动相B

0

95%

5%

1.0

95%

5%

2.0

40%

60%

14.0

5%

95%

18.0

5%

95%

18.1

95%

5%

20.0

95%

5%

6.2.1.2质谱条件

6.2.1.2.1以下为参考条件，可根据不同品牌仪器等实际情况进行调整。

a)离子源：电喷雾电离-正离子模式(ESI+)。

b)喷雾电压：3500V。

c)辅助气流速：10Arb。

d)鞘气流速：40Arb。

e)加热器温度：300℃。

f)毛细管温度：350℃。

g)一级扫描分辨率：60000.

h)二级扫描分辨率：17500.

i)扫描范围：m/z100~1000。

j)碰撞能量：20eV、25eV、30eV、35eV、40eV。

6.2.1.2.2在符合6.2.1.1和6.2.1.2的液相色谱条件和质谱条件下，目标物的相关信息、质谱参数、保留时间和检出限参见附录A。

6.2.2进样

分别吸取空白样品提取液、检材样品提取液和添加样品提取液，按6.2.1的条件进样分析。

6.3记录

记录空白样品、检材样品和添加样品中目标物可疑色谱峰的保留时间、前体离子、碎片离子和离子丰度比。

6.4定性判断依据

以保留时间、前体离子、碎片离子和离子丰度比作为定性判断依据。应满足以下要求。

a)在相同试验条件下，检材样品中出现前体离子与单同位素峰的理论值质量精度至少在5×10*以内。

b)