第三章 原料鱼和肉的鲜度.ppt

1.原理：Bio-RadAG1-X4树脂（100-200目）强阴离子树脂，季铵盐R-CH2-N+(CH3)3，氯离子型.Hx和HxR与阴离子柱吸附能力弱，用弱离子溶液就可以洗脱下来。核苷酸的磷酸根带负离子，可以吸附在阴离子柱上。ATP、ADP、AMP、IMP的磷酸根含量依次增高，与阴离子柱有交换吸附。用离子强度大的洗脱剂可以洗脱下来。（三）离子交换简易分析2.试剂洗脱液A：硼砂1.9g，NaCl1.2g，1mol/LHCl22.5mL，1mol/L乙二胺10mL，定容到1000mL洗脱液B：NaCl17.4g，1mol/LHCl150mL，定容到1000mL离子交换简易分析1.样品的制备取鱼肉粉碎，准确称取1g置于10mL离心试管中，加入冰冷的10%PCA2mL，用玻璃棒搅拌，离心，取上清液。用10mol/LKOH中和至pH为6.5，沉淀部分离心除去，用冰水洗涤沉淀，最后用10mL容量瓶定容后，放入-20℃的冷冻室内保存待用。离子交换简易分析2.柱子的制备取Bio-RadAG1-X4树脂100g，放入1L的烧杯中，1mol/LNaOH和1mol/L的HCl溶液反复洗涤，然后用水洗至呈中性，放入冰箱内冷藏备用。树脂柱采用0.8×18cm玻璃柱，底部用玻璃纤维垫底，柱内装入树脂高度约5cm，灌注时避免有气泡产生。柱子先用洗脱液A洗柱。离子交换简易分析3.分离取2ml鱼肉提取液置于50mL烧杯中，用0.5mol/L的氨水调节pH值至9.4,使之通过层析柱。再以20mL9.4的氨水洗脱层析柱，洗脱出为与ATP无关的部分。然后再以45mL洗脱液A（1000mL中硼砂1.9g，NaCl1.2g，1mol/LHCl22.5mL，1mol/L乙二胺10mL）洗脱，收集洗脱组分A（HxR＋Hx）。再以45mL洗脱液B（1000mL中NaCl17.4g，1mol/LHCl150mL）洗脱，收集洗脱组分B（ATP＋ADP＋AMP＋IMP）。离子交换简易分析4.比色：洗脱液A和洗脱液B定容到50ml，用紫外可见分光光度计在250nm处分别测定其吸光度A250nm(A)和A250nm(B)，按下式计算K值。计算：K值=A250nm(A)/[A250nm(A)+A250nm(B)]离子交换简易分析

一、原理：将三甲胺抽提于无水甲苯中，与苦辣酸作用，形成黄色的苦味酸三甲胺盐，于410nm下有最大吸收。然后与标准管同进比色，即可测得检样中三甲胺氮含量。

苦味酸比色法苦味酸三甲胺性质:易溶于甲苯溶液中,以分子状态存在。在水溶液中以离子状态存在410nm加入甲醛的目的：消除氨的干扰6HCHO＋4NH3→(CH2)6N4+6H2O1、?20%三氯乙酸溶液。2、甲苯：试剂级，用无水硫酸钠脱水，再用1N硫酸振摇、蒸馏，除干扰物质，最后再用无水硫酸钠脱水使其干燥。3、苦味酸甲苯溶液：

储备液：将2g干燥的苦味酸（试剂级）溶于100mL无水甲苯中，使其成为2%苦味酸甲苯溶液。

应用液：将储备液稀释成为0.02%苦味酸甲苯溶液即可用。4、?1:1碳酸钾溶液。5?、10%甲醛溶液：先将甲醛用碳酸镁振摇处理并过滤，然后稀释成为10%浓度。

二、试剂

苦味酸比色法25mLMaijelGerson反应瓶。721型光电比色计。三、仪器苦味酸比色法1、检样外理：取被检肉样20g（视检样新鲜程度确定取样量）剪细研匀，加水70mL，提取后过滤。加20%三氯乙酸10mL，振摇，沉淀蛋白后过滤，滤液即可供测定用。2、呈色反应：萃取：取滤液5mL于反应瓶中，加10%甲醛溶液1mL，甲苯10mL及1：1碳酸钾溶液3mL。立即盖上塞，上下剧烈振摇60次，静置20min。吸去下面水层，加入无水硫酸钠约0.5g进行脱水。四、操作方法苦味酸比色法比色反应：吸出5mL甲苯萃取液于预先已置有0.02%苦味酸甲苯溶液5mL的试管中，轻轻摇动，混合均匀，在410nm处测得吸光度，并做一空白试验。苦味酸比色法3.标准曲线：配置盐酸三甲胺（试剂级）约为0.1％，用微量或半微量凯氏蒸馏法准确测定三甲胺-氮量。再稀释成10ug/mL的三甲胺-氮，作为储备液用。准备吸取后稀释标准液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL（相当于10ug、20ug、30ug、40ug、50ug）于25mLMaijelGerson反应瓶中，加蒸馏水中至5.0mL，按上法同样测定，确定三甲胺-N与光密度制备标准曲线。苦味酸比色法样品实验标准曲线（10ug/mL的三甲胺－氮）mL