植物离体培养育种.pptVIP

花药材料的选取选材关键在于选取花粉处于合适发育期的花药，离体培养后才能启动花粉发育。实践表明，从减数分裂期至双核期的花药，均有可能诱导离体孤雌发育。大多数园艺植物的花药培养，成功率最高的时期为单核期，或单核中晚期。12花药培养技术步骤选幼年树花蕾取下花蕾3-5度低温冷处理3-10天取花药镜检消毒接种培养再生50年代开始裸子植物花粉培养，获得愈伤组织；60年代被子植物花粉培养失败；1974年Nitsch等次曼陀罗和烟草花粉获得植株从少量花粉获得大量花粉植株；避免花药壁产生的体细胞愈伤组织干扰，直接观察小孢子发育过程；花粉培养的优点花粉培养花粉培养技术步骤药壁向花粉提供营养物质；通过药壁吸收、贮存和转化培养基中的外源物质选幼年树花蕾取下花蕾（镜检）预培养数天取花药接种分离花粉低温预处理消毒过滤离心再生影响花药（粉）培养的因素供体基因型差异和发育差异甜椒、天竺葵旺盛植株，早期花蕾花药（花粉）的生理状态花粉发育期四分体期、小孢子早期、中期和晚期（单核靠边期）、有丝分裂期和双核花粉期利用花粉和花药培养于育种时，需足量供选择单倍体植株。故如何提高诱导形成率十分重要。培养条件很关键。培养前低温预处理培养基与培养方式的影响花药、花粉培养前和培养初期的短期高温、低温、离心、减压等。3-5?C3-10天，提高小孢子反应能力：曼陀罗、天仙子、柑桔花药培养采用最多的培养基为MS。我国科学工作者研制的N6和马铃薯培养基；液体悬浮培养比固体培养基好；细胞分裂素有利于花粉胚形成；早期要求高蔗糖浓度：5-10%再生植株倍性和单倍体植株的保存及其加倍在通过花药培养获得的再生植株中，除单倍体植株外，非单倍体出现的频率与植物种类、再生途径以及培养基的成分有关。一般来说，在通过胚状体途径获得的再生植株中，其单倍体植株占有率较高。但种类不同也存在差异。例如从烟草花药再生植株几乎全部是单倍体植株，而在大白菜和油菜上，单倍体植株则分别占74%和22%。在经过愈伤组织、器官分化途径所获得的再生植株中，倍性变化更为常见。如在水稻的花药培养中，再生植株的倍性变化为x~5x。随着培养基中植物激素浓度的增加也会降低从中再生植株的单倍体占有率。为什么有此倍性变化？单倍体植株当然来自花粉。二倍体或多倍体植株则较复杂，可能是花粉的自然加倍，可能来自花药组织的体细胞及其变异。鉴定方法：观察后代遗传性状是否分离；同工酶分析；分子标记技术等。1花粉培养再生的植株倍性也有变化，但由于操作上完全排除了体细胞的干扰，形成二倍体或多倍体均来自花粉的自然加倍。所以，可直接用于育种实际。21.再生植株的倍性2.单倍体植株的保存和加倍单倍体植株不能正常结实，为了保持所获得的单倍体材料，常用的方法是将无菌苗的茎尖培养在无激素或低浓度激素的培养基上并定期转移。然而，单倍体非最终育种目标，需要染色体加倍。方法有：A.单倍体植株组织培养再生切取单倍体植株的茎、叶等组织进行培养，可获加倍植株。B.人工处理诱导加倍常用秋水仙素处理，洗静后转移到新培养基中诱导植株再生。具体方法有——培养细胞的处理；试管小苗的处理；顶芽、腋芽处理；花轴处理等。02生长周期短，繁殖率高植物组织培养是由于人为控制培养条件，根据不同植物不同部位的不同要求而提供不同的培养条件，因此生长较快。总体来说成本低廉，且能及时提供规格一致的优质种苗或脱病毒种苗。03管理方便，利于工厂化生产和自动化控制植物组织培养是在一定的场所和环境下，人为提供一定的温度、光照、湿度、营养、激素等条件，既利于高度集约化和高密度工厂化生产，也利于自动化控制生产。培养条件可以人为控制组织培养摆脱了大自然中四季、昼夜的变化以及灾害性气候的不利影响，且条件均一，对植物生长极为有利，便于稳定地进行周年培养生产。01植物组织培养特点种质资源保存和交换：愈伤组织培养、茎尖培养克服杂交不亲和：花药培养、细胞融合脱毒：微芽嫁接、茎尖培养快繁：人工种子、茎尖培养CBAD技术用途0102MS培养基它是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。特点是无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液。其养分的数量和比例较合适，可满足植物的营养和生理需要。它的硝酸盐含量较其他培养基为高，广泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养，效果良好。有些培养基是由它演变而来的。B5培养基是1968年由Galmborg等为培养大豆根细胞而设计的。其主要特点是含有较低的铵，这可能对不少培养物的生长有抑制作用。从实践得知有些植物在B5培养基上生长更适宜，如