第六章其他光学分析法课件.pptx

第六章其他光学分析法

光学分析法非光谱法光谱法根据待测物质（原子或分子）发射或吸收的电磁辐射，以及待测物质与电磁辐射的相互作用而建立起来的定性、定量和结构分析方法，统称为光学分析法。折射法、衍射法、干涉法、旋光法、散射浊度法等原子发射光谱法、荧光光谱法、化学发光法原子吸收光谱法、紫外-可见分光光谱法红外光谱法、X射线吸收光谱法、核磁共振波谱法等光学分析法的分类

荧光分析法第一节

某些物质吸收紫外-可见光后，可以发射其波长比吸收光更长的光，并且随照射光的消失而消失，这种发射光称为荧光（fluorescence）。荧光分析法（fluorometry）是利用某些物质发射荧光的特性进行定性、定量分析的光学分析方法，又称荧光光谱法。

电子由激发单重态→基态单重态的跃迁荧光与磷光产生示意图1.荧光的产生

任何荧光物质都具有两个特征光谱：激发光谱和荧光光谱（发射光谱）激发光谱是当荧光波长一定时，荧光强度随激发光波长而变化的关系曲线（以激发光波长λex为横坐标、荧光的发光强度F为纵坐标的光谱）。2.激发光谱和荧光光谱（发射光谱）荧光检测示意图

荧光光谱是当使激发光波长和强度不变，而让物质所产生的荧光通过发射分光系统(Ⅱ)分光，测定每一发射波长的荧光强度F，以发射光波长λem为横坐标、荧光的发光强度F为纵坐标作图所得的关系曲线。激发光谱及荧光光谱

（1）荧光物质的特征①具有强的可见-紫外吸收，即具有K带强吸收。②具有高的荧光效率。3.荧光与分子结构荧光效率

（2）分子结构与荧光的关系①具有长的共轭π键结构。3.荧光与分子结构λex（激发）λem（激发）φF苯2052780.11萘2863210.29蒽365400046四苯3904800.60不同分子结构物质的激发光波长和荧光波长（nm）

②分子的刚性和共平面性。3.荧光与分子结构联苯（φF=0.18）芴（φF=1.0）③取代基的影响。

温度溶剂溶液的酸碱性荧光熄灭剂散射光激发光源4.影响荧光强度的外界因素

荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数，从各个角度反映了分子的成键和结构情况。4.荧光分光光度计（1）仪器类型①滤光片荧光计②滤光片-单色器荧光计③荧光分光光度计

（2）荧光分光光度计的基本结构1.光源2、4、7、9.狭缝3.激发单色器5.样品池6.表面吸光物质8.发射单色器10.检测器11.放大器12.指示器13.记录器荧光分光光度计结构示意图

①光源：目前最常用的是氙灯。②单色器（分光系统）：激发单色器、发射单色器。③样品池：测定荧光用的样品池必须用低荧光材料或石英。④检测器：光电倍增管。

①激光荧光分析。②时间分辨荧光分析。③同步荧光分析。④胶束增敏荧光分析。⑤三维荧光光谱分析。5.荧光分析新技术原油试样在环乙烷中的等角三维投影光谱图

由于荧光物质的结构不同，其吸收光的波长不同，发射出荧光的波长也不同，这就是荧光分光光度法对能产生荧光的物质进行定性分析的依据。实验证明，在稀溶液中，荧光强度与荧光物质的浓度成正比，这是荧光分光光度法对荧光物质进行定量分析的依据。6.荧光强度与物质浓度的关系

当溶液中荧光物质的浓度为c、液层厚度为（吸收池内径）L时，由于荧光强度F正比于被荧光物质吸收光的强度：F∝（I0–I），用线性方程表示为：F=K′（I0–I）K′为常数，称为荧光比率，其大小取决于一定条件下的荧光效率，结合比尔定律可得到下式：F=2.303·φF·I0·ε·c·L入射光强度I0在波长一定、光源稳定时为固定值，因此可以将2.303·φF·I0·ε·L视为常数K，故：F=Kc

当其他条件也一定时，荧光物质在稀溶液中的荧光强度与浓度呈线性关系，这是荧光定量分析的依据。但只有当荧光物质的浓度很小时，即ε·c·L≤0.05，这种关系才成立。请分析为什么荧光分光光度法的灵敏度比紫外-可见分光光度法要高？

7.定量分析方法①标准曲线法：配制一系列浓度为c1、c2、c3…的对照品溶液，分别测其F1、F2、F3…值，用F-c作图绘制标准曲线。然后在同样条件下测定试样溶液的Fx，在标准曲线上查找对应的浓度cx。

②比例法：若荧光分析标准曲线过原点，则可选择其线性范围用比例法测定。即配制一对照品溶液（cs）测其荧光强度（Fs），再测定试样溶液（cx）的荧光强度（Fx），然后进行比较。测定时同样要以空白（F0）校正：

③多组分混合物测定：与吸光度一样，荧光强度也有加和性，因此混合物不需经过分离，可用