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单宁酶开题报告

单宁酶开题报告模板

单宁酶是一种水解酶，能水解没食子酸单宁中的酯键和缩酚酸键，生成没

食子酸和其他化合物。在酶制剂工业发达的国家，如日本、美国，单宁酶的基础理

论和应用研究工作开展得较早，并已在茶饮业中取得了较好的经济效益。随着国民

经济的不断发展，人们生活水平的不断提高，单宁酶得到了更广泛的应用。人们已

在皮革业、饲料业、化妆品业等方面开发了单宁酶的多种用途。中国是个茶叶大

国，而且可开发资源丰富，单宁酶的应用前景十分广阔。单宁酶的性质国外对单

宁酶性质的研究相对较多，也较深入，为今后的应用研究提供了有价值的参考。

单宁酶的酶学性质来源于不同菌种的单宁酶动力学性质稍有区别。YamadaH.等报

道的黄曲霉单宁酶活性稳定pH值范围最窄，为5.0～5.5另据韩国的ChaeSoo-

Kyu等报道的曲霉菌种AN-11单宁酶活性稳定的pH值为5.0～6.5其他菌种单宁

酶活性稳定pH范围大都在3.0～8.0之间，最适pH值为4～6，热稳定范围在70

～80℃以下，最适反应温度为35～60℃。日本科学家Hdeaki

-4Yamada等就底物浓度对黄曲霉的影响进行了研究，测出Km(以单宁为

底物)为0.5×10

-4mol/L;Km(以葡萄糖212没食子酸为底物)为1.4×10mol/L；Km(以

没食子酸甲酯为底物)

-4为8.6×10mol/L。经6mol/L盐酸胍处理后，单宁酶将发生不可逆失

活，各种金属离子以及

EDTA对酶活性影响报道结论不一。

单宁酶的物理化学性质

纯单宁酶在紫外光区280nm处，有一个最大吸收峰，在浓度为10%，比

色皿为1cm×1cm条件下，吸光系数a为11.8，260nm处吸光度与280nm处吸光

度之比为0.51。

SadaakiIibuchi，ChaeSoo-Kyu分别用凝胶过滤法测定出它们各自选

育的菌种单宁酶相对分子质量都为200000。OsaoAdachi等分别用沉降法和电

泳法测定黄曲霉单宁酶相对分子质量，分别是194000和192000。Chantal等测

出黑曲霉LCF8单宁酶相对分子质量为186000，其等电点在4左右。Chantal和

ChaeSoo-Kyu在对各自提纯的酶进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析时发现，单宁

酶分子由2种亚基组成，但这个结果与KengiAoki对酵母单宁酶结构分析的结果

有所不同。后者用同样的方法，只得到一条电泳蛋白带。

OsaoAdachi等进一步研究了黄曲霉单宁酶的其他结构特性，其分子中

氮含量为12.9%(凯氏定氮法)，用二硝基氟苯法测氨基末端，有2个DNP-氨基酸

产物，分别为DNP-丙氨酸与DNP-精氨酸,这一结果进一步指明黄曲霉单宁酶为2种

亚基组成。单宁酶另一重要特征是，它为一种糖蛋白，而不同来源的单宁酶糖含量

有差异。例如，黄曲霉单宁酶糖基占总相对分子质量的25%，糖基为甘露糖。

Chantal从黑曲霉中提取的单宁酶，其糖基含量高达43%，而酵母单宁酶糖基含量

为62%。ParthasarathyN.等探明其选育的黑曲霉单宁酶碳水化合物为

葡萄糖和甘露糖，肽链通过丝氨酸和苏氨酸与糖基相连接。糖基与酶的功

能关系还未见报道。单宁酶的催化性质

SaddakiIibuchi等对米曲霉单宁酶的催化途径、底物的专一性和阻遏

作用进行了研究。结果表明，单宁酶催化葡萄糖酸酯，水解成没食子酸与葡萄糖。

中间产物为1，2，3，4，6-黄酰单宁和2，3,4，6-四酰单宁以及两种没食子酸葡

萄糖。反应途径如下所示：

单宁酶只能水解没食子酸化合物中的酯键，不对底物类似物如甲基间二羟

甲酸盐起作用。酶对底物是否有催化作用决定于ES复合物的形成。ES复合物形成

条件有3点：a.只要是没食子酸形成的酯,对醇没有限制；b.酚羟基在苯环上相对

位置不同，将影响其与酶的结合作用；c.形成的ES复合物中酚羟基形成的酯键可

被水解，而其他酯键或羧基由于没有直接与酶结合，不能发生以上的反应。酶反应

受到含酚羧基的底物类似物的竞争性抑制，但2,