第十三章高效液相色谱法作者姓名袁志江作者单位山西药科职业课件.pptx

作者姓名：袁志江作者单位：山西药科职业学院第十三章高效液相色谱法

第一节概述第二节高效液相色谱法的主要类型及原理第三节高效液相色谱法的固定相和流动相第四节分离条件的选择目录第十五章高效液相色普法

第五节高效液相色谱仪第六节定性定量分析法第七节毛细管电泳分离分析法简介目录第十五章高效液相色普法

学习目标掌握化学键合相、固定相和流动相、反相键合相色谱法的分离条件、速率理论熟悉高效液相色谱仪的结构、定性定量分析方法了解主要类型及原理、有关计算、毛细管电泳分离的基本原理、毛细管电泳仪第十五章高效液相色普法

概述第一节第十五章高效液相色普法

（1）高压：压力可达15～30Mpa。（2）高速：流速为0.1～10.0ml/min。（3）高效：可达每米5000塔板以上。在一根柱中同时分离的成分可达100种。（4）高灵敏度：紫外检测器的灵敏度可达0.01ng，同时消耗样品少，具有分离、分析的双重作用。1.高效液相色谱法（HPLC）的特点第一节概述

2.经典液相色谱法与高效液相色谱法的比较高效液相色谱法经典液相色谱法柱长：10～25cm10～200cm口径：2～10mm10～50mm粒度：5～50μm（2500～300目）75～600μm（200～30目）柱压力：2～20MPa0.001～0.1MPa柱效：2×103～5×104/m2～50/m进样量：10-6～10-2g1～10g分析时间：3分钟～1小时1～20小时第一节概述

1．高效液相色谱法（HPLC）的流动相与经典液相色谱法一样均为液体，但其区别是在HPLC的液体流动相是在高压泵的作用下将试样输送到色谱柱中进行分离。2．高效液相色谱法（HPLC）具有高压、高速、高效和高灵敏度的特点。小结第一节概述

高效液相色谱法的主要类型及原理第二节第十五章高效液相色普法

（1）化学键合相色谱法(主要）。（2）离子抑制色谱法。（3）离子对色谱法。（4）离子色谱法。（5）亲和色谱法。1.主要类型第二节高效液相色谱法的主要类型及原理

（1）化学键合相是采用化学反应的方法将官能团键合在载体表面所形成的固定相。（2）以化学键合相为固定相的色谱法简称键合相色谱法(bondedphasechromatography，BPC)。（3）化学键合相的优点固定相的均一性和稳定性好，使用过程中不易流失，使用周期长。柱效高，重现性好。能使用的流动相和键合相的种类多，分离的选择性高。（4）根据化学键合相与流动相极性的相对强弱分类：分为正相（normalphase，NP）和反相（reversedphase，RP）键合相色谱法。2.化学键合相色谱法第二节高效液相色谱法的主要类型及原理

正相键合相色谱法正相键合相色谱法（固定相的极性大于流动相的极性）采用极性键合相为固定相，如氰基（－CN）、氨基（－NH2）或二羟基键合硅胶。流动相：非极性或弱极性溶剂加极性调节剂如烷烃加醇类（正己烷-甲醇）。适用范围：溶于有机溶剂的极性至中等极性的分子型化合物。分离机制：将有机键合层看作一层液膜，溶质在两相间溶解。极性强的组分k大，保留时间（tR）长,后洗脱出柱。第二节高效液相色谱法的主要类型及原理

反相键合相色谱法反相键合相色谱法（固定相的极性小于流动相的极性）固定相：非极性键合相如十八烷基硅烷（C18，ODS）、辛烷基（C8）键合硅胶。流动相：以水为基础溶剂，加入一定量与水混溶的极性调节剂，常用甲醇-水、乙腈-水等。应用范围：较广泛，适用于非极性至中等极性的组分分离。分离机制：保留行为。主要是利用非极性溶质分子或溶质分子中的非极性基团与极性溶剂接触时产生排斥力，而从溶剂中被“挤出”，即产生疏溶剂作用，促使溶质分子与键合相表面的非极性的烷基发生疏水缔合，而使溶质分子保留在固定相中。第二节高效液相色谱法的主要类型及原理

反相键合相色谱法保留行为的主要影响因素溶质的分子结构（极性）：极性越弱，疏水性越强，k越大，tR也越大；反之亦然。固定相：键合烷基的疏水性随碳链的延长而增加，溶