化学进展讲座省公开课一等奖全国示范课微课金奖课件.pptx

秋夕

杜牧

银烛秋光冷画屏,

轻罗小扇扑流萤。

天阶夜色凉如水,

坐看牵牛织女星。;第2页;第3页;第4页;化学进展讲座之

荧光素;内容提要;荧光素概念; 许多物质都可产生荧光现象，但并非都可用作荧光色素。只有那些能产生显著荧光并能作为染料使用有机化合物才能称为免疫荧光色素或荧光染料。;荧光素分类;1.异硫氰酸荧光素（FITC）：为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水或酒精等溶剂。分子量为389.4，最大吸收光波长为490～495nm，最大发射光波长520～530nm，展现明亮黄绿色荧光。其主要优点是：①人眼对黄绿色较为敏感；②通常切片标本中绿色荧光少于红色。

;2.四乙基罗丹明（RB200）：为橘红色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮。性质稳定，可长久保留。最大吸收光波长为570nm，最大发射光波长为595～600nm，呈橘红色荧光。;3.四甲基异硫氰酸罗丹明（TRITC）：最大吸引光波长为550nm，最大发射光波长为620nm，呈橙红色荧光。与FITC翠绿色荧光对比鲜明，可配适用于双重标识或对比染色。其异硫氰基可与蛋医学教丨育网整理白质结合，但荧光效率较低。;4.藻红蛋白（R-RE）：本品为无定形，褐红色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮，性质稳定，可长久保留。最大吸引光波长为565nm，最大发射光波长为578nm，呈明亮橙色荧光。与FITC翠绿色荧光对比鲜明，故被广泛用于对比染色或用于两种不一样颜色荧光抗体双重染色。;荧光素性质;荧光素荧光原理; 不一样种类萤火虫发光颜色也不一样，有黄绿，有橙红，亮度也各不相同。这是因为它们所含荧光素和荧光酶各不相同之故。雄虫发光频率也有改变，并非整晚发光频率都一样。

; 荧光素用作化学分析指示剂、生物染色剂和化装品着色剂。; 氧化还原指示剂：荧光光度分析硫离子，滴定氯、溴和碘。荧光素是发光物质基质，使许多生物含有荧光物质，它与ATP形成复合物(荧光素腺苷)，然后再与荧光酶结合，氧化过程中激活荧光素发光。整个反应用作活生物检出或对很低程度细菌污染作定量分析。比如用荧光光度计计量。

; 荧光素用作荧光吸附指示剂：用于沉淀滴定测定Cl-、Br-、I-及SCN-银盐。还用作酸碱滴定荧光指示剂，PH值4.0(蓝绿色)~6.6(绿色)。; 荧光素在临床上可用做诊疗试剂、是一个防腐药和轻泻剂，也可用于防癌治疗。; 四溴荧光素(TBF)是荧光素类化合物一个，因为其高选择性和高灵敏度在光度法中已得到广泛应用。TBF能够对肝腹水型细胞和正常肾细胞发生光敏作用，从而杀伤细胞。; 萤火虫荧光反应中释放能量几乎全部以光形式释放，只有极少部分以热形式释放，反应效率为95%，这么发出来光，由於大部份能量都转为光能，只有少部份化为热能，所以称之为冷光。而热光则发光效率低得多，如太阳发光效率只有35%左右。人类到当前为止还没方法制造出如此高效光源。也就因为发光质与光能转换相当有效率，所以萤火虫能够发光相当长一段时间。

; 美国雪城大学研发团体从萤火虫发光原理中得到启示，正致力于开发不需要电力灯，或将于未来取代LED。据介绍，该研发团体即将发光质与发光酵素涂抹在纳米棒表面，纳米棒由两种半导体所制。依据纳米棒大小，此种生物灯将展现出绿、橙、红三种颜色改变。; 荧光素酶发光体系应用在多个领域中，如基础生命科学研究、快速检测、环境监测、临床医学等。通常在进行活体成像时，先将荧光素酶基因克隆到宿主细胞中使其得到表示，检测时再向细胞内注入荧光素,发生荧光素．荧光素酶反应，产生荧光，进行成像。可是，此操作方法有点繁杂，需要外界注入荧光素，而且这么发出荧光也达不到完全意义上适时效果。假如能对荧光素性质和生物合成路径有了更深入认识，知道了荧光素合成过程中所需要各种生物酶,而且将这些酶基因克隆出来．让宿主细胞本身合成荧光素．重组细胞也将成为真正意义上生物发光体，就不需要从外界注入荧光素。那时生物发光作为一个检测伎俩，它应用价值将会非常巨大。;第25页