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01种子细胞选择02种子细胞增殖与放大培养03大规模培养体系建立植物细胞规模化培养体系的建立外植体选择植物类型：遗传基础。在确定生产某一种化合物以后，首先必须准确选择那些能够产生目的化合物的植物种类及品种或单株。组织器官：由于天然产物一般为次生代谢产物，而植物次生代谢产物的积累具有组织器官的特异性，因此，在起始细胞培养时尽量选择自然状态下产生天然产物的器官、组织作为外植体。种子细胞选择高产细胞系的筛选种子细胞选择logo悬浮细胞系单细胞克隆种细胞增殖2015准备材料提供技术参数摇瓶反应器种子细胞增殖与放大培养成批培养、连续培养和半连续培养。培养方式根据次生产物积累而定，通常还根据不同要求进行改进。如当细胞生长和产物合成需要不同的培养基时，就需要采用两步法培养，先在细胞生长培养基中培养大批量细胞，当细胞生长至合成产物的阶段后，将其转至产物合成培养基中培养，在产物合成阶段又可采用连续培养方式以延长细胞生产时间。培养方式的选择大规模培养体系的建立适合植物细胞培养的反应器应该具有适宜的氧传递、良好的流动性和较低的剪切力。是指用于高等生物细胞批量化培养的装置及其相应控制系统。气动式搅拌式固定化式其它—光照生物反应器，转鼓式生物反应器类型及特点植物细胞培养生物反应器反应器类型体积（L）培养植物种类搅拌式7，15D.carota胡萝卜搅拌式20，15500N.tabacum烟草搅拌式5000C.roseus长春花螺旋搅拌式20C.blumei五彩苏提升搅拌式2.5P.elliotii湿地松鼓泡式20，30，130P.ginseng人参鼓泡式65，1500N.tabacum烟草外环气升式10，30，85C.roseus长春花导筒气升式20，210D.lanata狭叶毛地黄转鼓式1－4V.rosea长春花01是根据植物细胞特性在微生物发酵罐基础上改进而成。02搅拌装置要减少剪切，一般改叶轮式为螺旋式。03必须设计加液装置04必须设计通气装置05适宜的取样口搅拌式反应器0102又称空气提升式反应器特点：剪切力小，但搅拌不很均匀。Flash气动式反应器较容易地控制培养系统的理化环境，可以研究特定的代谢途径，便于调节。可以从培养基中提取产物，免除了培养基中因初级代谢产物积累造成对代谢的反馈抑制，延长生产周期，进行连续生产。细胞位置的固定使其所处环境类似于在植物体中所处的状态，相互间接触密切，可形成一定的理化梯度，有利于次生产物合成。特点：固定化反应器主要有流化床、膜反应器和填充反应器种类：包埋式固定化培养系统：支持物多采用琼脂、琼脂糖、藻酸盐和聚丙烯酰胺等附着式固定化培养系统：支持物多采用尼龙网、聚氨酯泡沫和中空纤维等。植物细胞固定化一般采取凝胶包埋、膜固定、网格和泡沫固定和表面吸附等。固定化反应器Alfermann等(1983)用气升式系统，采用海藻钙固定细胞成功地用30L和200L的反应器生产地高辛。Jose等(1983)进一步用中空纤维反应器培养胡萝卜和碧东茄生产代谢产物酚类物质Mavituna等（1987）使用板式反应器和循环床反应器培养固定化辣椒细胞，最大辣椒素生产速率（以干辣椒细胞计）达到0.5mg／g／d，与成熟期辣椒合成辣椒素的速率相当。细胞体积大。其平均直径比细菌大几十倍01通常以2～200个细胞，直径2mm大小的非均匀小细胞团形式存在。02抗剪切能力弱。03生长速度慢，周期长，培养基成分复杂，有利于微生物生长，因此在培养中维持无菌环境难度较大但又十分重要。04悬浮培养系统必须适应植物细胞特性规模化培养中有关工程技术问题是由细胞密度和细胞状态变化造成的烟草细胞培养，当细胞密度低于7g/L时，培养液粘度基本不变，而高于此值时，培养液粘度增加。长春花细胞培养密度在10g/L时，培养液粘度有赖于细胞年龄、形态和细胞团大小。在相同物质浓度下,大细胞团的营养液表观粘度明显大于小细胞团的表观粘度。010302培养液的流变特性－－粘度变化规模化培养中有关工程技术问题氧气含量调节规模化培养中有关工程技术问题KLa（氧的传递系数，Nv=Kla(C*-C)）：如在4L的气升式反应器中进行长春花细胞培养时，KLa在20h-1左右时。细胞生长与次生产物合成维持在良好状态；在15L通风式反应器中培养的烟草细胞，当KLa在5~10h-1的范围内，生物量和代谢产物随KLa增加而增加。溶氧浓度：毛地黄细胞培养，当培养基氧浓度从10％饱和度上升至30％，细胞生长速率从0.15d