酶工程微生物发酵产酶课件课件.ppt

六、提高酶产量的措施1、添加诱导物对于诱导酶的发酵生产，在发酵培养基中添加诱导物能使酶的产量显著增加。一般可分为三类：①酶的作用底物，例如乳糖诱导?-半乳糖苷酶的生成，青霉素是青霉素酚化酶的诱导物。②酶的反应产物，例如纤维素二糖可诱导纤维素酶的产生。③酶的底物类似物，例如异丙基-?-D-硫代半乳糖苷（IPTG）对?-半乳糖苷酶的诱导效果比乳糖高几百倍。其中使用最广泛的诱导物是不参与代谢的底物类似物。第30页，共41页，星期日，2025年，2月5日2、控制阻遏物浓度微生物酶的生产受到代谢末端产物的阻遏和分解代谢物阻遏的调节。为避免分解代谢物的阻遏作用，可采用难于利用的碳源，或采用分次添加碳源的方法使培养基中的碳源保持在不致于引起分解代谢物阻遏的浓度。第31页，共41页，星期日，2025年，2月5日3、添加表面活性剂在发酵生产中，非离子型的表面活性剂常被用作产酶促进剂，但它的作用机理尚未搞清；可能是由于它的作用改变了细胞的通透性，使更多的酶从细胞内透过细胞膜泄漏出来，从而打破了胞内酶合成的反馈平衡，提高了酶的产量。此外，有些表面活性剂对酶分子有一定的稳定作用，可以提高酶的活力，例如在霉菌的发酵生产中添加1%的吐温可使纤维素酶的产量提高几倍到几十倍。第32页，共41页，星期日，2025年，2月5日4、添加产酶促进剂产酶促进剂是指那些能提高酶产量但作用机理尚未阐明的物质，它可能是酶的激活剂或稳定剂，也可能是产酶微生物的生长因子，或有害金属的螫合剂，例如添加植酸钙可使多种霉菌的蛋白酶和橘青霉的5’-磷酸二酯酶的产量提高2—20倍。第33页，共41页，星期日，2025年，2月5日第四节酶生物合成模式第34页，共41页，星期日，2025年，2月5日第35页，共41页，星期日，2025年，2月5日第36页，共41页，星期日，2025年，2月5日关于酶工程微生物发酵产酶课件第1页，共41页，星期日，2025年，2月5日本章内容酶的发酵生产的概念——→优良菌种的筛选——→发酵的基本类型——→发酵工艺过程及条件控制*酶的生物合成模式第2页，共41页，星期日，2025年，2月5日在酶制剂发展的早期，酶多是从动植物原料中提取的。但是由于它们的生长周期长，酶在动植物组织中的含量低，又受地理、气候和季节等因素的影响，来源受到限制，不适于大规模的工业生产，因此除了部分用于医疗、疾病诊断及食品工业的酶外，目前基本都是以微生物作为生产酶的酶源，产酶微生物的发酵技术在酶生产中是极为重要的。第3页，共41页，星期日，2025年，2月5日发展微生物作为酶生产的来源主要有以下原因：①微生物生长繁殖快，生活周期短，产量高。②微生物培养方法简单。③微生物菌株种类繁多，酶的品种齐全。④微生物有较强的适应性和应变能力。第4页，共41页，星期日，2025年，2月5日经过预先设计，通过人工操作控制，利用细胞（包括微生物细胞、植物细胞和动物细胞）的生命活动，产生人们所需的酶的过程，称为酶的发酵生产。第5页，共41页，星期日，2025年，2月5日首先必须选择合适的产酶菌株然后采用适当的培养基和培养方式进行发酵，使微生物生长繁殖并合成大量所需的酶最后将酶分离纯化，制成一定的酶制剂。第6页，共41页，星期日，2025年，2月5日第7页，共41页，星期日，2025年，2月5日第一节优良产酶菌种的筛选酶的发酵生产的前提之一，是根据产酶的需要，选育到性能优良的产酶细胞。优良的产酶菌种是提高酶产量的关键，筛选符合生产需要的菌种是发酵生产酶的首要环节，一个优良的产酶菌种应具备以下几点：第8页，共41页，星期日，2025年，2月5日a繁殖快,产酶量高，有利于缩短生产周期。

???b容易培养和管理，能在便宜的底物上良好生长。

???c产酶性能稳定，菌株不易退化，不易受噬菌体侵袭。

???d产生的酶容易分离纯化。

???e安全可靠、无毒性。不是致病菌及产生有毒物质或其他生理活性物质的微生物，才能确保酶生产和应用的安全。

第9页，共41页，星期日，2025年，2月5日产酶菌种的筛选方法与发酵工程中微生物的筛选方法一致,主要包括以下几个步骤:含菌样品的采集,菌种分离,产酶性能测定及复筛等。第10页，共41页，星期日，2025年，2月5日1、含菌样品的采集：要获得产生某酶的菌种可从富含该酶作用底物的场所去采集含菌样品。2、富集培养：一般的菌样含所要分离的微生物量很少时，富集培养有利于某种产酶菌种的筛选。3、菌种纯化：生产菌在自