高效液相色谱法的新进展.ppt

进样系统进样系统是将被分析试样导入色谱柱的装置。对于液相色谱的进样装置，要求重复性好，死体积小，保证中心进样,进样时对色谱柱系统流量波动要小，便于实现自动化等。进样系统包括取样、进样两个功能,而实现这两个功能又分手动和自动两种方式。第22页，共50页，星期日，2025年，2月5日柱温箱柱温箱为放置色谱柱的地方，一般可以存放1～3根色谱柱。应用柱温箱可以保持色谱柱温度，不受外界环境影响，主要表现为分析结果重现性好、提高柱效、降低柱压、保证检测稳定性。较为先进的柱温箱不但可以保持较高温度（80～100℃），也可以保持较低温度（低于室温10℃），同时可设置温度程序控制。第23页，共50页，星期日，2025年，2月5日色谱柱色谱柱是高效液相色谱仪的核心部件，要求分离度高、柱容量大、分析速度快。要达到如此好的性能，不仅与固定相本身的性能有关，而且与色谱柱结构、装填和使用技术等有关。第24页，共50页，星期日，2025年，2月5日色谱柱的使用及保养1.使用微径柱时，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也需作适当的调整。当对其测定结果产生争议时，应以品种项下规定的色谱条件的测定结果为准。2.以硅胶为载体的键合固定相的使用温度通常不超过40℃，为改善分离效果可适当提高色谱柱使用温度，但不宜超过60℃。第25页，共50页，星期日，2025年，2月5日检测器高效液相色谱法具有高效、高速、高灵敏度的特点。微量组分经色谱柱分离后的检测既不能用人的肉眼也不能分段取样后用仪器检测，只能采用检测器在色谱柱后直接检测。样品组分洗脱液中的浓度或物理量变化，由检测器连续地转换成电信号，在记录仪上迅速地给出直观的信息。操作者可按照所描绘的色谱峰位置来定量地判断分离情况的优劣,并根据峰面积定量地测定各组分的含量。第26页，共50页，星期日，2025年，2月5日最常用的检测器为紫外检测器，包括二极管阵列检测器、其他常见的检测器有荧光检测器、示差折光检测器、蒸发光散射检测器、电化学检测器和质谱检测器等。第27页，共50页，星期日，2025年，2月5日馏分收集器如果所进行的色谱分离不是为了纯粹的色谱分析，而是为了做了其他波谱鉴定,或获得少量试验样品的小型制备，馏分收集是必要的。用小试管收集、手工操作，只适合于少数几个馏分，手续麻烦，易出差错。馏分收集器比较理想，因为便于用微处理机控制，按预先规定好的程序，或按时间，或按色谱峰的起落信号逐一收集和重复多次收集。第28页，共50页，星期日，2025年，2月5日数据采集及处理把检测器的信号转换为色谱图，一般采用色谱积分仪及色谱工作站进行。积分仪较为简单，可以设定积分参数，记录保留时间、峰号以及峰面积，但是分离度和理论板数需手工计算，偏差较大；积分仪可储存少量色谱图，但关机后储存的色谱图即不再保存；积分仪记录介质多为热敏纸，保存时间较长后颜色消退，需另行复印后保存。第29页，共50页，星期日，2025年，2月5日目前大部分高效液相色谱仪数据采集多用色谱工作站。较为简单的色谱工作站一般为国内开发，价格较为便宜，但只能进行数据采集，色谱条件只能由仪器设定。相对于积分仪来说，由于使用计算机控制，色谱图比较一目了然，改变积分参数后，可清晰看出色谱图的变化；可以进行分离度、理论板数等简单计算。第30页，共50页，星期日，2025年，2月5日第三节检测方法第31页，共50页，星期日，2025年，2月5日紫外检测法紫外检测法是高效液相色谱中最常用的检测方法。由于有机化合物中近百分之八十都具有紫外吸收，因此紫外检测器的应用最早也最广。这种检测器具有很高的灵敏度，对环境温度及流速波动不甚敏感，适用于梯度洗脱操作。但是紫外检测器一次只能得到一个波长的色谱图，而二极管阵列检测器可以采集三维图谱，针对每一个色谱峰可以进行光谱扫描，进行峰纯度测定。第32页，共50页，星期日，2025年，2月5日电化学检测法高效液相色谱中的电化学检测法，是利用电化学固有的灵敏度对洗脱液中痕量电活性物质进行定性定量分析，既具有宽的线性动力学测定范围(106)及高的灵敏度(10-12g)，可与荧光检测法相比，又可用于色谱行为相似而电化学性质不同的化合物的测定，更具有专属性。因此，在药物分析中，高效液相色谱电化学检测法，主要应用于复杂样品中痕量组分的选择测定，以及较复杂生物样品中药物及其代谢物的测定。第33页，共50页，星期日，2025年，2月5日第五节色谱仪常见故障的分析和排除方法第34页，共50页，星期日，2025年，2月5日