苛养菌的分离培养.ppt

注意：该菌能产生自溶酶，易自溶，故采集时标本不易放冰箱，应保温立即送检。必要时可作双份血清测定抗体效价的变化。第29页，共66页，星期日，2025年，2月5日淋球菌1879年，奈瑟从35例急性尿道炎、阴道炎及新生儿急性结膜炎病人的分泌物中，分离出淋病双球菌。1885年，Bumm在人、牛或羊的凝固血清培养基上培养淋球菌获得成功第30页，共66页，星期日，2025年，2月5日保温保湿及时送检，及时接种(30min内)，培养基应孵热后再接种。标本取后应立即接种于培养基中。国外常用的培养基有Thayer-Martin培养基及改良的Stuart运送培养基。国内也已研制成国产培养基，如加多粘菌素E(25μg/mL)的血液琼脂或巧克力琼脂。初代分离时应用5%二氧化碳环境(烛缸)，培养温度36℃为宜，相对湿度80%以上。培养24～48h观看结果。第31页，共66页，星期日，2025年，2月5日淋球菌在多粘菌素B血液琼脂(一种常用的培养基)上经24～48小时培养之后，可形成圆形、凸起、湿润、光滑、半透明或灰白色的菌落。如继续培养，菌落体积增大，表面粗糙，边缘皱缩。如表现为以上情况，初步判定为淋球菌阳性。第32页，共66页，星期日，2025年，2月5日形态与染色淋球菌呈卵圆形或豆形，菌体长0.6～0.88um，宽约0.58um。常成对排列，邻近面扁平或稍凹陷，像两粒豆子对在一起。无鞭毛，不形成芽孢。在急性感染的机体内，其形态较典型，多位于细胞浆内。慢性期则在细胞外。淋球菌革兰染色阴性。第33页，共66页，星期日，2025年，2月5日首先该菌生长较慢，营养要求高，需要在5%CO2环境下才能生长良好----这是区别于其他奈瑟菌的前提。接下来是作氧化酶+、触酶+，其他生化反应采用酶法进行，可用非发酵菌用的糖类生化管：葡萄糖（+）、麦芽糖、乳糖、蔗糖、果糖，其他须作硝还、DNA试验均阴性。第34页，共66页，星期日，2025年，2月5日涂片时不要用力涂擦，以防止细胞破裂和变形。涂片厚薄要合适。涂片过薄，涂片中几乎没有细胞，会造成假阴性;涂片过厚，脱色不易干净，会使各种成分难以分辨。女性生殖道中有些菌如不动杆菌等很象淋球菌，常可造成涂片的假阳性结果。咽和直肠标本的直接涂片结果也常由于正常菌丛或各种杂菌的掩盖而不可靠。第35页，共66页，星期日，2025年，2月5日只有培养法才是金标准方法，也只有培养法才能获得药敏结果，尤其对PPNG这样多重耐药的淋球菌意义更大，在糖类生化管表面加液体石蜡的目的是因为淋病奈瑟菌是以发酵形式利用糖类，而在氧气存在时发酵代谢受到抑制，加入石蜡则可隔离氧气，使得细菌的发酵产酸现象更为明显，便于观察。第36页，共66页，星期日，2025年，2月5日再则，之所以要用非发酵菌的生化管，是因为其配方中糖类与蛋白胨的比例为1:0.2，细菌分解蛋白胨产碱较少，不足以影响代谢糖类时的产酸；还因为培养基中加入了少量琼脂可使代谢时所产生的酸性物质能在局部聚积，使得颜色变化现象更为明显，如此便提高生化管的灵敏度。第37页，共66页，星期日，2025年，2月5日F卡他莫拉菌革兰氏染色显示为阴性，故为革兰氏阴性非发酵菌。过去一直认为卡他莫拉菌是对人体无致病性的上呼吸道正常寄居菌。但是，近20多年的研究发现，该菌不仅可以引起儿童和老年人的上呼吸道感染，而且还是引起成人下呼吸道感染的主要病原菌，是儿童中耳炎、肺炎以及成人的慢性下呼吸道感染的第3位最常见致病菌，仅次于流感嗜血杆菌和肺炎链球菌，而且其发病率逐年增加。第38页，共66页，星期日，2025年，2月5日形态学卡他莫拉菌又称为卡他奈瑟菌和卡他布兰汉菌。卡他莫拉菌在血平板、巧克力平板等各种培养基上生长良好，菌落呈“冰球”状。培养24h后形成灰白色、光滑、直径1-3mm不透明、不溶血的菌落，易从培养上刮下培养48h后，形成表面干燥、不平、边缘不整齐的菌落，如用接种环推移，整个菌落可移动（有特殊手感）。第39页，共66页，星期日，2025年，2月5日卡他莫拉无芽孢、无鞭毛，形态上易于其他奈瑟菌属相混淆。本菌不分解任何糖类，可产生氧化酶、触酶和DNA酶。硝酸盐还原试验阳性。与脑膜炎奈瑟球菌的鉴别卡他莫拉是DNA、硝酸盐还原均为阳性。与莫拉菌属的鉴别卡他为球菌，成双或肾性排列，DNA阳性；而莫拉为球杆菌,DNA为阴性第40页，共66页，星期日，2025年，2月5日军团菌军团菌是隐藏在空调制冷装置中的致病菌，随冷风吹出浮游在空气中，吸入人体后会出现上呼吸道感染及发热的症状，严重者可导致呼吸衰竭和肾衰竭。军团菌最早是由于部队室内密闭作业，导致群体发生上呼吸道感染而得名。军团病是一种非常严重的、有时可以致命的肺炎。第41