细胞周期同步化.pptVIP

细胞周期同步化将处于不同时相的细胞分离开来，从而获得不同时期的细胞群体。细胞周期同步化自然同步化人工选择同步化有丝分裂选择法密度梯度离心法药物诱导DNA合成阻断法分裂中期阻断法自然界中已经存在一些细胞群体处于细胞周期的同一时相01如有一种黏菌的变形体plasmodia，只进行核分裂而不进行胞质分裂，结果形成多核体结构。所有细胞核在同一细胞质中进行同步分裂。02某些受精卵早期卵裂03自然同步化有丝分裂选择法：对数期的单层培养细胞——细胞分裂活跃，处于分裂期的细胞变圆，贴壁生长——振荡使细胞脱落，悬浮到培养液中——收集培养液，离心——获得分裂期细胞，从新培养，获得不同时相的细胞01优点是细胞未经过任何药物处理，能真实反映细胞周期状况，细胞同步化效率高。缺点是分离的细胞数量少。02人工选择同步化密度梯度离心法：根据不同时期的细胞在体积和重量上存在差别进行分离。得到处于不同时期的细胞。优点是方法简单省时，效率高，成本低。缺点是对大多数种类的细胞并不适用。壹贰药物诱导DNA合成阻断法——G1/S-TdR双阻断法：1、将过量的TdR加入细胞培养液，所有S期的细胞立刻被抑制，其他细胞运行到G1/S交界处被抑制。2、将TdR洗脱，解除抑制，被抑制的细胞沿细胞周期运行。3、在解除抑制的细胞到达G1期终点前，第二次加入TdR并继续培养，所有的细胞被抑制在G1/S交界处。4、将TdR洗脱，加入新鲜培养液培养一定时间，可获得S期和G2不同时间点的同步化细胞。优点是同步化效率高，几乎适合所有的体外培养的细胞体系。缺点是诱导过程可造成细胞非均衡生长。DNA抑制剂：TdR和羟基脲壹贰