生物样品中药物定量分析的指导原则与实验实施.pptxVIP

生物样品定量分析指导原则与试验实行;措施学确证是整个药代动力学研究的基础。

所有药代动力学研究成果，都依赖于生物样品的测定，只有可靠的措施才能得出可靠的成果。

通过精确度、精密度、特异性、敏捷度、重现性、稳定性等研究建立了测定措施，得到了原则曲线后，在检测过程中还应进行措施学质控，制备随行原则曲线并对质控样品进行测定，以保证检测措施的可靠性。;CFDA有关有关生物样品定量分析的规定

化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则

化学药物临床药代动力学研究技术指导原则

化学药物制剂人体生物运用度和生物等效性研究技术指导原则

9012生物样品定量分析措施验证指导原则;国外有关指导原则

FDA：GuidanceforIndustryBioanalyticalMethodValidation

EMEA：Guidelineonbioanalyticalmethodvalidation;CFDA;EMEA;FDA;1.范围

测定对象确定——生物基质中的药物浓度。

适合于非临床或临床试验样品实际分析的基本规定。

规定部分验证或交叉验证的合用范围。;2.1完整验证

每个物种和每种基质进行完整验证。

难以获得相似基质，可以采用合适基质替代并给出理由。

完整验证包括：选择性、定量下限、响应函数和校正范围、精确度、精密度、基质效应、分析物的稳定性。;对照原则物质

对照原则物质的溶液+空白生物基质=校正标样

色谱法需要使用内标

对照原则物质需要提供：

分析证书、储存条件、失效日期、批号。

内标：

证明可合用，即无干扰。;辨别目的分析物和内标与基质的内源性组分或样品中其他组分（代谢产物或共同服用的其他药物）。

6个不一样来源的空白基质分别分析。

如有干扰，则干扰的峰面积不不小于LLOQ的峰面积的20%，不不小于内标峰面积的5%，可以接受。;在新药研究中需要按照规定在汇报上提供对应数量的经典色谱图;假如待测组分是内源性成分？;假如待测组分是内源性成分？;假如存在外源性非测定成分影响？（例如中西药合并给药）;C.Wangetal./J.Chromatogr.B854()48–56;前一针进样的残留对后一针进样的干扰。

一般多发生在高浓度进样后。

先进一针工作曲线的最高浓度，再紧接着进一针空白，观测与否有干扰，干扰峰???积不不小于LLOQ的峰面积的20%，不不小于内标峰面积的5%，可以接受。

如干扰，需要消除。;犬血浆中的盐酸克伦特罗的测定

;可以被可靠定量的样品中分析物的最低浓度，具有可接受的精确度和精密度。

是原则曲线的最低点。

应当满足预期的浓度与试验目的。

精确度应在标示值的+/-20%范围内。

变异系数不得超过20%。;指定浓度范围内评价仪器对分析物的响应程度。

制备各个浓度的校正标样——基质相似。

每个分析批都应当有一条原则曲线。

6个校正浓度水平+空白样品+零浓度样品（空白+内标）

验证中需要评价3条原则曲线。

回算浓度应当在标示值的+/-15%，LLOQ+/-20%之内

回算浓度偏差=【（实测值－标示值）/标示值】X100%;当线性范围较宽的时候，推荐采用加权的措施对原则曲线进行计算，以使低浓度点计算得比较精确。即低浓度点满足回算的规定。;精确度是指在确定的分析条件下，测得的生物样品浓度与真实浓度的靠近程度。

校正标样——绘制工作曲线。

质控样品——评估精确度。

用4个浓度评价

定量下限

低浓度QC～～LLOQ的3倍以内

中浓度QC～～原则曲线中间浓度

高浓度QC～～原则曲线上限的75%;批内精确度：1个分析批进行验证，每个浓度至少5个样品。

批间精确度：3个分析批进行验证，且至少进行两天，每个浓度至少5个样品。;分析物反复测定的靠近程度。

测量值的相对原则偏差（变异系数）。

采用与精确度验证相似的分析批成果进行计算。

4个浓度验证。

定量下限变异系数不超过20%。

其他浓度点不超过15%。;;判断样品稀释后与否会影响定量的精确度和精密度。

配制高于定量上限浓度的样品。

用空白基质稀释该样品。

每个稀释因子至少测定5个数据，其精确度和精密度应在+/-15%之内。;质谱措施应当考察基质效应。

采用至少6批来自不一样供体的基质，不可以合并基质。

选择高、低两个质控浓度进行。

求算不一样浓度的基质因子。

计算内标归一化基质因子=分析物基质因子/内标基质因子

变异系数15%;空白血浆沉淀蛋白

＋

原则溶液

浓度C;J.Wenetal./J.Chromatogr.B867()153–159;选择低浓度和高浓度质控样品进行验证。

预处理后或者在对应条件储存后立即分析得到该条件下数据。

制备随行原则曲线，求算上述质控样品的浓度，与标示浓度比较，均值应与标示浓度的偏差在+/-15%之内。【不是