色谱分析方法导论.ppt

由表中可见，当n=5时，即5个塔板体积的流动相进入柱中时，组分就开始从柱口流出。并且呈现先小后大的情况。第62页，共106页，星期日，2025年，2月5日以上是当塔板数为5时的情况，出现的峰形不对称，这是由于塔板数太少的原因。当塔板数大于50时，峰形就是对称的。在实际色谱柱中，n值很大（约为106～109）。所以色谱峰一般为正态分布。第63页，共106页，星期日，2025年，2月5日（二）柱效能指标：对于一个色谱柱来说，其分离能力（叫柱效能）的大小主要与塔板的数目有关，塔板数越多，柱效能越高。色谱柱的塔板数可以用理论塔板数和有效塔板数来表示。第64页，共106页，星期日，2025年，2月5日式中：tR为某组分的保留时间；W1/2为某组分色谱峰的半宽度；W为色谱峰的峰底宽度。由式可见，柱子的理论塔板数与峰宽和保留时间有关。保留时间越大，峰越窄，理论塔板数就越多。柱效能也就越高。1．理论塔板数n：对于一个柱子下说，其理论塔板数可由下式计算：第65页，共106页，星期日，2025年，2月5日对于一个柱长固定为L的柱子，其理论塔板高度H为每一个塔板的高度，即组分在柱内每达成一次分配平衡所需要的柱长叫理论塔板高度。它越小，也表示柱效能越高。第66页，共106页，星期日，2025年，2月5日2．有效塔板数n有效：在以上计算理论塔板数的式子中使用的是保留时间，它包括了死时间，它与组分在柱内的分配无关，因此不能真正反映色谱柱的柱效。为此，引入了有效塔板数的概念。第67页，共106页，星期日，2025年，2月5日同理有效塔板高度为：第68页，共106页，星期日，2025年，2月5日3.塔板理论的特点：(1)当色谱柱长度一定时，塔板数n越大(塔板高度H越小)，被测组分在柱内被分配的次数越多，柱效能则越高，所得色谱峰越窄。(2)不同物质在同一色谱柱上的分配系数不同，用有效塔板数和有效塔板高度作为衡量柱效能的指标时，应指明测定物质。(3)柱效不能表示被分离组分的实际分离效果，当两组分的分配系数K相同时，无论该色谱柱的塔板数多大，都无法分离。(4)塔板理论无法指出影响柱效的因素及提高柱效的途径。第69页，共106页，星期日，2025年，2月5日三．速率理论——范弟姆特方程式：塔板理论是一个半经验性的理论。它定性的给出了板高的概念，但不能指出影响板高的因素。速率理论就是在塔板理论的基础上，给出了影响塔板高度的因素：第70页，共106页，星期日，2025年，2月5日u为流动相线速度；A，B，C为常数，其中A—分别表示涡流扩散系数；B—分子扩散系数；C—传质阻力系数（包括液相和固相传质阻力系数）。该式从动力学角度很好地解释了影响板高（柱效）的各种因素！任何减少方程右边三项数值的方法，都可降低H，从而提高柱效。第71页，共106页，星期日，2025年，2月5日1）涡流扩散项(A)在填充柱中，由于受到固定相颗粒的阻碍，组份在迁移过程中随流动相不断改变方向，形成紊乱的“涡流”：从图中可见，因填充物颗粒大小及填充的不均匀性——同一组分运行路线长短不同——流出时间不同——峰形展宽。展宽程度以A表示：A=2?dp其中dp—填充物平均直径；?—填充不规则因子。可见，使用细粒的固定相并填充均匀可减小A，提高柱效。对于空心毛细管柱，无涡流扩散，即A=0。流动方向第72页，共106页，星期日，2025年，2月5日第73页，共106页，星期日，2025年，2月5日2）分子扩散项(B/u)纵向分子扩散是由于浓度梯度引起的。当样品被注入色谱柱时，它呈“塞子”状分布。随着流动相的推进，“塞子”因浓度梯度而向前后自发地扩散，使谱峰展宽。其大小为B=2?D?—称为弯曲因子，它表示固定相几何形状对自由分子扩散的阻碍情况；D—组分在流动相中的扩散系数。组份为气体或液体时，分别以Dg或Dm表示；第74页，共106页，星期日，2025年，2月5日讨论：分子量大的组分，Dg小，即B小Dg随柱温升高而增加，随柱压降低而减小；流动相分子量大，Dg小，即B小；u增加，组份停留时间短，纵向扩散小；（B/u）对于液相色谱，因Dm较小，B项可勿略。球状颗粒；大分子量流动相；适当增加流速；短柱；低温。第75页，共106页，星期日，2025年，2月5日其中，Fco为柱出口的载气流速（mL/min)，其值为：F0-检测器出口流速；Tr-室温；Tc