真核基因表达调控 (5).ppt

1.2DNA甲基化与表达调控前面涉及到甲基化的内容?第23页，共70页，星期日，2025年，2月5日1、原核生物中，DNA甲基化是为了抵抗噬菌体侵害而发生碱基C和A上的化学修饰。如大肠杆菌的限制修饰系统中，自身DNA特定位点的甲基化可以避免限制性内切酶的切割。2、真核生物中，甲基化被分为对称性甲基化（canotical/symmetricmethylation），包括CpG和CpNpG），以及非对称甲基化（asymmetricmethylation），包括CpHpH。多数细胞5－甲基胞嘧啶主要出现在CpG中。DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、组蛋白修饰及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。第24页，共70页，星期日，2025年，2月5日DNA甲基化的位点DNA甲基化主要形成5－甲基胞嘧啶（5-mC）和少量的N6-甲基嘌呤（N6-mA）及7－甲基鸟嘌呤（7-mG）C5-mCN6-mA7-mG第25页，共70页，星期日，2025年，2月5日DNAmethylase甲基化转移酶：包括日常性甲基化转移酶和从头合成型甲基化转移酶;日常性甲基化转移酶是遗传DNA甲基化状态最重要的酶类，它可以在甲基化母链模板的指导下甲基化新合成链的相应位点，使DNA迅速由半甲基化状态转变为完全甲基化状态，即参与甲基化的维持（maintenance）;从头合成型甲基化转移酶可以催化未甲基化的CpG成为mCpG，此过程不需母链指导，但速度很慢。但这一类甲基化酶是特异基因受甲基化调控的主要因子，在基因表达的表观遗传学调控中起十分重要的作用。第26页，共70页，星期日，2025年，2月5日CpGisland：一段富含未甲基化的CpG双核苷酸的长约1-2Kb的DNA序列。特点：真核生物约一半的存在于所有组成型表达的管家基因中，但这些CpG岛处于组成型非甲基化状态另外一半出现在部分（40%）组织特异性调控基因的启动子中。·人类基因组中有~29,000CpGislands.·CpG岛的甲基化阻止了启动子的活化.·RepressioniscausedbyproteinsthatbindtomethylatedCpGdoublets.CpGislands：作为甲基化调控基因转录的单位第27页，共70页，星期日，2025年，2月5日甲基化调控基因转录的机制DNA甲基化导致DNA构象发生变化，影响了蛋白质与DNA的相互作用，抑制了转录因子与启动区DNA的结合效率。甲基化达到一定程度时，发生B-DNA向Z-DNA导过渡。Z-DNA结构收缩，螺旋加深，与蛋白因子结合的一些原件缩入大沟而不利于结构基因的转录利用相同序列但甲基化程度不同的DNA为模板研究RNAP的活性时，甲基化程度高不利于RNAP与模板的结合，降低了体外转录活性第28页，共70页，星期日，2025年，2月5日DNA甲基化可以使特定的阻遏物结合到DNA上阻遏转录。弱启动子上稀少甲基化就使转录失活；加上一增强子，不需去甲基化就恢复转录活性；若进一步提高甲基化程度，仍无活性第29页，共70页，星期日，2025年，2月5日DNA甲基化程度对转录的抑制作用低转录活性无转录活性低转录活性无转录活性高转录活性高转录活性高转录活性无转录活性第30页，共70页，星期日，2025年，2月5日人a-珠蛋白基因，小鼠a-珠蛋白基因和人y-珠蛋白基因的CpG密度依次降低；未甲基化3基因都能表达，全部甲基化都不表达；引入增强子后，全部甲基化的小鼠a-珠蛋白基因和人y-珠蛋白基因能表达；引入增强子后，部分甲基化的人a-珠蛋白基因表达，全部甲基化后不表达。第31页，共70页，星期日，2025年，2月5日AfullymethylatedsiteisapalindromicsequencethatismethylatedonbothstrandsofDNA.MostDNAmethylationsarefoundoncytosineonbothstrandsoftheCpGdoublet.Ahemi-methylatedsiteisapalindromicsequencethatismethylatedononlyonestrandofDNA.Replicationconvertsafullymethylatedsitetoahemi-methylatedsite.Ademethylaseisacasualna