药品微生物限度与无菌检查方法验证实验的要点及体会.pptVIP

无菌检查样品**三点体会：二是无菌检查时应强调“检验数量”，主要是保证实验结果的代表性，而阳性对照实验和验证实验仅须满足“检验量”总量要求即可，以检验样品对实验结果的影响，即保证实验结果的可靠性，验证实验可以由此减少大量的样品；无菌检查样品**三点体会：三是对“检验数量”和“检验量”的把握应考虑便于实际操作，比如处理100ml/袋的样品，取9袋样品一次分配到一组三联滤器，“检验数量”大于药典规定的6个，但“检验量”似乎不符合药典规定的每袋样品取半量检验的规定，仅为1/3，但根据药典“检验量”即为“一次实验所用供试品的总量（g或ml）”的解释，这与先将6袋分配两个滤筒、再将剩下3袋抽入一个滤筒作为阳性对照的方法一样，却更节省时间。菌种和实验用菌液**枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis[CMCC（B）63501]金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus[CMCC（B）26003]生孢梭菌Clostridiumsporogenes[CMCC（B）64941]铜绿假单胞菌Pseudomonasaeruginosa[CMCC（B）10104]大肠埃希菌Escherichiacoli[CMCC（B）44102]白色念珠菌Candidaalbicans[CMCC（F）98001]黑曲霉Aspergillusniger[CMCC（F）98003]菌种和实验用菌液**验证用菌种的保藏使用频繁传代限制（5代）菌种保藏及应用参考方法：菌种和实验用菌液**干菌种（0代）100ml液体培养基复苏（1代）100ml液体培养基复壮（2代）加100ml20%无菌甘油混匀，1ml/管冻存管分装，-20℃或-80℃保存每次使用取1支自然（室温）解冻，取0.1ml接种至10ml液体培养基（生孢梭菌用12ml硫乙醇酸盐流体培养基）按规定培养、稀释（3代）注意：已经解冻的冻存管不能再冷冻保存，以免冻融！菌种和实验用菌液**各实验室应根据自身操作习惯总结出一套切实可行、快速稳定的菌液制备标准程序。菌种和实验用菌液**logo参考菌液制备标准程序：取经34℃培养18-24小时的枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、绿假单胞菌与大肠埃希菌的营养肉汤培养物1ml，加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，分别10倍稀释备用（枯草芽孢杆菌至10-5、金黄色葡萄球菌10-6、绿假单胞菌与大肠埃希菌至10-7）；菌种和实验用菌液**参考菌液制备标准程序：01取经34℃培养18～24小时的生孢梭菌硫乙醇酸盐流体培养物1ml，加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-7备用；02菌种和实验用菌液**参考菌液制备标准程序：取经24℃培养18～24小时的白色念珠菌改良马丁培养物1ml，加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-5备用；菌种和实验用菌液**参考菌液制备标准程序：取经培养一周的黑曲霉菌改良马丁琼脂斜面培养物，加0.9%无菌氯化钠溶液5ml，洗下孢子，转移至另一空管，加0.9%无菌氯化钠溶液至与标准比浊管浊度相当后，取1ml加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-4备用。关于黑曲霉：菌种和实验用菌液**转种操作应在超净工作台（或相当此环境）中进行，关闭风机，靠近酒精灯操作；置23～28℃培养5～7日，培养斜面形态可参照下图；转种完毕的冻存管和使用过的器具应经121℃湿热灭菌30分钟再作处理；030102菌种和实验用菌液**关于黑曲霉：黑曲霉孢子相当稳定，可以保存于4℃0.9%氯化钠溶液中较长时间，作为孢子悬液储备液使用。由此可以减少菌液制备工作量和反复操作黑曲霉的风险。菌种和实验用菌液**1菌液检验：2结合验证实验方法进行活菌计数。3生孢梭菌可在同步硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度实验中计数。标准化操作**方法选择样品处理冲洗方法和条件中和剂加入菌液加入方法选择标准化操作**取样量大于5ml/支直接接种法不再适用；01除非样品不许可（难溶解），发展趋势应采用全封闭的薄膜过滤法。02样品处理标准化操作**主要强调固体样品的溶解、转移、均匀分配问题。通常将规定取样量全部转移到400～500ml稀释剂或者适宜溶液，再进行分配。各厂家均专门开发有固体制剂（粉针）专用滤器，我们提出了更为简便的无菌三针单联管。冲洗方法标准化操