DB32T 2957-2016 鲤疱疹病毒Ⅱ型PCR检测方法.pdfVIP

ICS65.150

B50

备案号：51404-2016DB32

江苏省地方标准

DB32/T2957-2016

鲤疱疹病毒Ⅱ型PCR检测方法

PCRinspectionspecificationofcyprinidherpesvirusⅡ

2016-09-20发布2016-11-20实施

江苏省质量技术监督局发布

DB32/T2957-2016

前言

本标准按GB/T1.1–2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》要求进行编写。

本标准由江苏省海洋与渔业局提出。

本标准起草单位：江苏省水生动物疫病预防控制中心。

本标准主要起草人：陈辉、袁锐、方苹、倪金俤、刘训猛、陈静、郭立新、吴亚锋

I

DB32/T2957-2016

鲤疱疹病毒Ⅱ型PCR检测方法

1范围

本标准规定了鲤疱疹病毒Ⅱ型（cyprinidherpesvirusⅡ)检测方法的试剂和材料、仪器和设备、

采样、检测步骤和结果判断。

本标准适用于鲫鱼疱疹病毒病病原的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法

SC/T7014-2008水生动物产地检疫采样技术规范

3试剂和材料

3.1水

符合GB/T6682-2008中一级水的规格。(该水用来配置规范性附录A中所列试剂)

3.2无水乙醇

3.3十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）

3.4TaqDNA聚合酶及配套的10×PCR缓冲液

TaqDNA聚合酶或ExTaqDNA聚合酶，生化试剂，-20℃保存。10×PCR缓冲液为该酶配套的相

应反应缓冲液，生化试剂，-20℃保存。

3.5MgCl（25mmol/L）：生化试剂，-20℃保存。

2

3.6dNTPs混合物

含dATP、dTTP、dCTP、dGTP各10mmol/L的混合物，-20℃保存。

3.75×TBE电泳缓冲液（按附录A的规定）。

3.86×DNA上样缓冲液（按附录A的规定）。

3.9引物及扩增片段

鲤疱疹病毒Ⅱ型DNA聚合酶基因扩增引物：P1：5’-CCCAGCAACATGTGCGACGG-3’，P2：5’-

CCGTARTGAGAGTTGGCGCA-3’。扩增片段大小为362bp。

注：该引物为扩增鲤疱疹病毒Ⅱ型DNA聚合酶基因的通用引物。

3.10DNA分子量标准

1

DB32/T2957-2016

宜使用DNAmarker2000，各片段大小依次为：2000bp，1000bp，750bp，500bp，250bp，100bp，

也可使用其他合适的DNA分子量标准。

3.11阳性对照

阳性对照为已知受鲤疱疹病毒Ⅱ型感染，且PCR检测结果为鲤疱疹病毒Ⅱ型阳性