硫酸铵纯化抗体.pdfVIP

1.兔抗人IgG抗体的初步纯化

(硫酸铵沉淀法）

一、基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯

化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫

球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋

白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，

使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用

不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。

盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小

和不易使蛋白质变性而应用最广。

二、试剂及仪器1.组织培养上清液、血清样品或腹水等2.硫

酸铵(NH)SO3.饱和硫酸铵溶液4.蒸馏水5.PBS(含0.2g

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/L叠氮钠)6.透析袋7.超速离心机8.pH计9.磁力搅拌

器

三，操作步骤以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉

淀。各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。

通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33%—50%。

（一）配制饱和硫酸铵溶液1.将767g(NH)SO边搅拌边慢慢加