细胞凋亡及其相关进展.ppt

**Bcl-2家族成员都含有1-4个Bcl-2同源结构域（BH1-4），并且通常有一个羧端跨膜结构域(transmembraneregion,TM)。其中BH4是抗凋亡蛋白所特有的结构域，BH3是与促进凋亡有关的结构域。根据功能和结构可将Bcl-2基因家族分为两类（图15-7），一类是抗凋亡的（anti-apoptotic），如：Bcl-2、Bcl-xl、Bcl-w、Mcl-1；一类是促进凋亡的（pro-apoptotic），如：Bax、Bak、Bad、Bid、Bim，在促凋亡蛋白中还有一类仅含BH3结构，如Bid、Bad。虽然Bcl-2蛋白存在于线粒体膜、内质网膜以及外核膜上，但主要定位于线粒体外膜，它拮抗促凋亡蛋白的功能。而大多数促凋亡蛋白则主要定位于细胞质，一旦细胞受到凋亡因子的诱导，它们可以向线粒体转位，通过寡聚化在线粒体外膜形成跨膜通道，或者开启线粒体的PT孔，从而导致线粒体中的凋亡因子释放，激活caspase，导致细胞凋亡。胞质中的促凋亡蛋白可通过不同的方式被激活，包括去磷酸化，如Bad；被caspase加工为活性分子，如Bid；从结合蛋白上释放出来，如Bim是与微管蛋白结合在一起的。*多数凋亡刺激因子通过线粒体激活细胞凋亡途经。有人认为受体介导的凋亡途经也有细胞色素C从线粒体的释放。如对Fas应答的细胞中，一类细胞（type1）中含有足够的胱解酶8?（caspase8）可被死亡受体活化从而导致细胞凋亡。在这类细胞中高表达Bcl-2并不能抑制Fas诱导的细胞凋亡。在另一类细胞（type2）如肝细胞中，Fas受体介导的胱解酶8活化不能达到很高的水平。因此这类细胞中的凋亡信号需要借助凋亡的线粒体途经来放大，而Bid?--?一种仅含有BH3结构域的Bcl-2家族蛋白是将凋亡信号从胱解酶8向线粒体传递的信使。

****细胞中还具有caspase的抑制因子，称为IAPs（inhibitorsofapoptosisproteins），属于一个庞大的蛋白家族。它们能通过BIR结构域（baculovirusIAPrepeatsdomain）[3]与caspase结合，抑制其活性，如XIAP。**在线虫中ced-3和ced-4的缺失突变抑制所有发育阶段的细胞死亡。在哺乳动物中，尽管Apaf-1基因缺失的小鼠没有caspase活化，但除了神经细胞过多外，大多数器官发育是正常的。为什麽？近年来的研究发现随细胞色素c释放的蛋白还有Smac（secondmitochondria-derivedactivatorofcaspase）。Smac能通过N端的几个氨基酸与IAPs（凋亡抑制蛋白）的BIR结构域结合，从而解除IAP对caspase的抑制；可见即使在caspase不参与的情况下，由线粒体途径仍可引起细胞凋亡。*******流式细胞仪（FlowCytometryFCM）的工作原理是将待测细胞放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱。通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测，得到该细胞的光散射和荧光指标，分析出其体积、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等物理及化学特征。细胞内的DNA含量随细胞周期进程发生周期性变化，如G0/G1期的DNA含量为2C，而G2期的DNA含量是4C。利用PI标记的方法，通过流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量进行测定，可分析细胞周期各时相的百分比。****中枢神经系统，一氧化氮合酶有三种：神经元型、内皮细胞型、诱生型。前两者为组织源性，也可刺激诱导产生。后者只有诱导产生。神经元、内生型皮细胞、胶质细胞和巨噬细胞损伤后均可产生iNOS（诱生型一氧化氮合酶），产生大量NO诱导凋亡。缺血性损伤可激活NO合酶。再灌注时，NO与超氧自由基结合，在酸性条件下分解为毒性更大的羟自由基及二氧化氮。加重缺血损伤**ROS（活性氧）作用不饱和脂肪酸（脑组织含量较高），引起脂质过氧化反应。氧自由基大量产生。Tau蛋白是微管相关蛋白，位于轴突，功能促进微管聚集，抑制解聚合稳定微管结构。缺少微管和树突，不能正确轴突传递。**但此方法不能鉴别细胞死亡的类型，要结合其他形态学方法来确定细胞是凋亡或坏死。****凋亡细胞呈胞膜出芽，染色质浓聚，核皱缩，细胞质减少，细胞体积缩小，凋亡小体。坏死细胞核肿胀，染色质聚集成团，最后裂解为鬼影细胞。分子结构不同,激发光谱和发射光谱也各异,荧光显微境激发光波长488nm，FITC检测发射光波长518nm，PI在620nm处检测。**属无脊椎动物线形动物门线虫纲个头小1mm最大特点：体细