混合斑的检验课件.pptVIP

混合斑的檢驗基本概念：混合斑是指兩名或兩名以上個體的血液或體液、分泌液混合形成的斑痕構成分類：不同個體同一種體液或分泌液混合而成----最常見的是混合血痕不同个体的不同体液或分泌液混合而成----最常见的是精液阴道分泌液混合檢測方法：經典方法----直接检测混合斑的遗传标记，然后与案件相关个体进行比对現代方法----分離混合斑中成分，分別進行遺傳標記的檢測檢驗程式：確證檢材是否是混合斑------然後檢測遺傳標記一、精液與陰道液混合斑1混合斑的确证精斑：细胞学方法-----精子的检出免疫學方法-----精斑确证最好试剂----抗P30血清生化學方法-----LDH-X陰道斑：細胞學方法陰道上皮細胞HE染色：大而扁平、形態不規則、細胞漿紅染嗜碘試驗：斑痕沉澱塗片，乾燥後+2滴Lugo’s碘液---2~3min鏡檢呈紅褐色或深黃褐色，（口腔上皮細胞不染色）生化學方法阴道肽酶（VP）是一種催化肽鍵水解的酶僅存在女性生殖道分泌液中，與年齡、性活動、月經週期無關。方法：澱粉凝膠電泳L-纈氨酸-L-亮氨酸注意：陽性檢出率只有64%，故陰性結果不能否定阴道液存在检出期限为7个月。?2混合斑中精液成分的个人识别ABO血型檢測對比推斷中和試驗、解離試驗、ELISA法等對照種類：嫌疑人、被害人及被害人丈夫的血液和唾液?結果分析：????注意事項：混合成分的比例影響不同種類血型物質的檢出分泌型的强弱，可以提供有用的信息混合斑被害人精液可能的血型嫌疑人ABSeseABSe???ASeABSe、BSe???BSeABSe、ASe???OSeABSe???ABSeABSe、Ase、Bse、OSe??特異成分

精子ABO血型檢驗----混合凝集

原理：抗原與抗體發生特異性結合後，再加入相應的紅細胞時，抗體又同紅細胞結合，結果形成檢材抗原-抗體-紅細胞三者結合

試劑：抗體效價：256倍指示红细胞：5%

精漿ABO血型檢驗----α2-精漿糖蛋白分子中的ABH抗原

糖鏈----ABH特異性抗原，用A、B、O红细胞和AB型人血清吸收

蛋白----有器官特异性抗原

解離試驗

Y+混合斑的浸出液ELISA夾心法

血清型、酶型對比推斷：血清型----Gm、Km酶型----PGM1、Fu

DNA分析常染色體：關鍵---获得纯净的精子DNA-----差異裂解或二步抽提法原理：精子細胞的表面蛋白含有大量的二硫鍵，可以抵抗去垢劑SDS核蛋白酶K的消化，而其他組織的細胞膜則可以被這兩種物質消化。方法：第一步：檢材+1%SDS+100ug/ml蛋白酶K---37度2~3h500r/min離心15min、去上清，精子留在沉澱物中第二步：+40Mm/LDTT+1%SDS+100ug/ml蛋白酶K----注意：消化條件選擇----主要是第一步消化時間消化不完全----当阴道上皮细胞过多，不能使两者彻底分离過渡消化----可能消化一部分精子細胞，導致精子DNA減少***实际操作前，应进行涂片检查，根据精子和阴道上皮細胞的比例，對消化時間、溫度、試劑的濃度等進行適當的調整提取方法选择