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KIF9双等位基因突变影响男性精子结构及功能的机制研究中文摘要

KIF9双等位基因突变影响男性精子结构及功能

的机制研究

中文摘要

背景：近年来我国生育率低迷，其中生育困难是重要因素之一。据测算12.5%

的育龄人口患有不孕不育问题，其中男性因素约占30%，男女双方共同因素占

20%。男性不育症是多方面因素造成的结果，其中30%的患者与遗传因素有关，睾

丸中有数以千计的基因表达，然而大部分与生育力的关系并未被阐明。部分患者无

法明确具体的病因，缺乏有效改善精子质量的针对性药物，导致病情反复出现且疗

效较差。

弱精子症(asthenospermia，AZS)是男性不育的主要原因，影响约18%的男性不

育患者。本研究收集92例AZS患者的外周全血，并进行外显子测序。在两名无血

缘关系的男性患者中，我们发现驱动蛋白家族9（kinesinfamilymember9，KIF9）

基因表达完全缺失，表现出典型的弱精子症状。驱动蛋白是一种分子马达，能够沿

着微管进行运动。先前的研究显示，高度保守的驱动蛋白家族成员9(KIF9)定位于

衣藻细胞的鞭毛中央微管对（centralpair，CP）；小鼠中Kif9表达的缺失也与AZS

表型相关。本研究拟通过精子参数分析、精子超微结构观察、免疫荧光染色及免疫

沉淀反应等方法，评估KIF9对人类精子结构及功能的影响。

192AZS

方法：（）通过全外显子组测序对例的不育患者进行变异基因筛选。

（2）Sanger测序：用合适的引物扩增目标基因组区域；SnapGene软件进行DNA序

列比对，鉴定基因突变类型。（3）Westernblot：检测候选蛋白的表达。（4）用KIF9

抗体对KIF9基因缺失患者和正常对照组的精子进行免疫荧光染色，以观察两组精子

KIF95(Transmissionelectronmicroscope

中蛋白定位。（）通过透射电子显微镜，

TEM)观察KIF9基因缺失患者的精子超微结构。（6）使用IVOS软件(版本

12,Hamilton-ThorneBiosciences)的计算机辅助分析系统(computer-assistedanalysis

system，CASA)分析KIF9基因缺失患者的精液参数。（7）采用免疫共沉淀（Co-

I

KIF9双等位基因突变影响男性精子结构及功能的机制研究英文摘要

ThemechanismofKIF9biallelicmutationaffectingmale

spermstructureandfunction

Abstract

Background:Inrecentyears,thebirthrateinChinahasbeenlow,anddifficultiesin

fertilityareoneoftheimportantfactors.Accordingtoestimates,12.5%ofthe

reproductive-agepopulationsuffersfrominfertilityproblems,withmalefactorsaccounting

forabout30%,andmaleandfemalesharedfactorsaccountingfor20%.Maleinfertilityis

theresultofmultiplefactors,with30%ofpatientsh