植物组织细胞培养生产紫杉醇的研究进展.ppt

植物组织细胞培养生产紫杉醇的

研究进展

背景介绍

•紫杉醇是红豆杉属植物中的

一种复杂的次生代谢产物,

也是目前所了解的惟一

一种可以促进微管聚合和

稳定已聚合微管的药物。

药理

•细胞接触紫杉醇后会在细胞内积累大量的微管，

这些微管的积累干扰了细胞的各种功能,特别是使

细胞分裂停止于有丝分裂期，阻断了细胞的正常

分裂。

•通过Ⅱ-Ⅲ临床研究，紫杉醇主要适用于卵巢癌

和乳腺癌，对肺癌、大肠癌、黑色素瘤、头颈部

癌、淋巴瘤、脑瘤也都有一定疗效。

获取紫杉醇的途径

•化学合成

•红豆杉中提取

•真菌发酵

•植物组织培养

化学合成

1.全合成：

路线复杂，反应条件难以控制，产率低，

用到剧毒原料，仅限于实验室水平

2.半合成：

国外专利技术壁垒，国内生产附加值低

红豆杉中直接提取

•资源匮乏红豆杉生长缓慢，

树皮剥取后不能再生，

树木将死去

•紫杉醇在植物体内含量极低，

最多0.069%

•需多步柱分离技术，生产成本高

真菌发酵

•真菌发酵生产紫杉醇因真菌的紫杉醇含量仅有植

物细胞的十万分之一,离生产的距离太远。

•从长远来看,植物组织培养才是解决紫杉醇供需矛

盾的最佳途径。

组织培养

•组织培养是在无菌和人为控制外因（营养成分、

光、温、湿）的条件下，培养和研究植物组织、

器官，甚至进而从中分化、发育出整体植株的技

术。

植物组织培养

•愈伤组织培养

•继代培养

•悬浮细胞培养

•紫衫细胞大量培养

愈伤组织培养

•选择合适的外植体：以幼茎为佳

•除去病原菌和杂菌：处理外植体

•配置合适的培养基。

•诱导及培养：将上述小块组织接种于MS培养基中，

于25℃的二氧化碳培养箱中培养40天。PH5.8，

诱导和分化，即可形成小的愈伤组织块

继代培养

•愈伤组织长出后经过4~6周的迅速细胞分裂，原

有培养基的水分和营养成分多以耗失有害代谢产

物已在培养基中积累，必须移植。即是继代

•愈伤组织也易分泌橙红色色素或发生褐化，使生

长速度减慢，甚至死亡（这是愈伤组织分泌的酚

类物质被氧化成醌类物质造成的）。

*缓解褐化

•在培养基中加入还原剂或吸收酚类的物质,可以减

少致死现象,保持愈伤组织的生长活性。

•如：半胱氨酸、维生素C、活性炭

•PS：由于吸附剂对营养物质和激素的吸收,较高浓

度的吸附剂会部分地抑制愈伤组织的生长

步骤：

悬浮培养

继代悬浮

悬浮细胞培养

•只有当愈伤组织经过长时期固体培养,表现出相当

的生理稳定性后,才能进行悬浮培养。一般采用B5

培养基，碳源多为蔗糖。

温度、接种量、光照强度，pH值等的改变均能影

响细胞的生长率和产物合成

加入培养基

•半连续培养：每隔一定时间倒出一定量的悬浮液，

同时补充加入等量的新鲜培养液

•连续培养：连续收获细胞，同时不断补充培养液

排出培养基及其培养

物

紫衫细胞大量培养

•前期利用碳水化合物的选择加快细胞生长,使细胞

量迅速增加。达到一定细胞量后,改用利于紫杉醇

合成的培养液。通过调整合成培养液的组成,延长

紫杉醇合成时间（静止期）。

•为了提高生产率，需要提高活性细胞浓度，大规

模地培养红豆杉细胞。现在已经发展了不少大规

模培养系统，同时使用固定化的细胞，原位提取

等现代发酵技术方法能够在一定程度上提高活性

细胞的浓度。

提高紫杉醇产量的方法

前体饲喂

添加诱导因子

添加抑制剂

筛选细胞株系

前体饲喂

•一方面可通过增加底物量来加快反应速度和提高

产率

•另一方面能够反馈抑制分支路径而促进反应顺利

进行,有效提高紫杉醇产量。

•常用：苯甲酸，苯甲酰甘氨酸

添加抑制剂

•添加抑制剂能够反馈抑制分支路径而使反应向有

利于紫杉醇合成的方向进行。

•发现合成代谢抑制剂氯化胆碱CCC可以使紫杉醇

含量提高，但浓度过高却抑制合成。

添加诱导子

•紫杉醇是一种植物防卫素，可以被诱导

•茉莉酸甲酯----参与植物