常规组织病理技术.pptVIP

常用透明剂二甲苯、甲苯、氯仿、香柏油等最常用二甲苯（折光率1.497）约30min目的：使石蜡充分进入组织中，使较软的组织块变成有一定硬度的组织蜡块而便于切片经过透明的组织块，进一步移入熔化的石蜡内浸渍，称为浸蜡。用其他浸透剂（火棉胶，碳蜡，明胶等）渗入组织内部的过程称为浸透或透入、浸蜡注意:●在浸蜡过程中，一般要2次或3次更01换蜡缸02浸蜡时间，一般更换3次石蜡总共在033h左右04浸蜡在温箱中进行温度！05浸蜡用的石蜡要定期更新（降级使用）06浸蜡用石蜡熔点较低,52-56℃07包埋*使用包埋剂将处理过的组织包于其中，使组织达到一定韧度和硬度，有利于切片。石蜡包埋法；快速石蜡包埋法等0102包埋蜡块组织芯片制作方法：组织芯片又称组织微列阵，是将数十个、数百个、乃至上千个小的组织片整齐的排列在某一载体上（通常是载波片）而成的微缩组织切片。制作：采用石蜡包埋法优点：方法简单易操作各组织基本在同一平面蜡与组织融合较好，不会出现崩块现象较小的蜡块可以包埋较多的组织附石蜡切片组织经石蜡包埋后制成的蜡块，用切片机制成切片的过程称为石蜡切片法。一般切成4~6μm，特殊情况可切1~2μm优点：操作简便、便于大批制作、便于長期保存切片前的准备：*高质量的蜡块和锋利的切片刀是保证切片质量的关键清洁的载玻片、恒温烤片装置、优质狼豪毛笔、弯嘴镊过程：切片、贴附、烤片12切片*轮转式切片机贴片*组织漂烘仪01.＞40℃,＜蜡的熔点02.60~70℃03.切片的注意事项1首先要求切片刀锋利，刀口无缺损，才能切出完整薄片2蜡块四周在切片时应修切整齐，尤其是上、下缘，要求平行3切片刀及蜡块都要固定牢靠，机身的各个部分及螺丝应予旋紧，4不可产生震动，摇动切片机时，用力不能过猛，以保持机身平5稳，防止震动6切片刀倾角不宜过大或过小，以20～30℃为佳7石蜡过软或室温过高，切片易粘于切片刀上，或发生皱缩，此时8可将蜡块置于水槽内冷冻后再切。反之，如室温过低或石蜡过9硬，切不成片时，可在蜡块切面上哈气加温105.编号、标记*取材剩余组织块可放于70%酒精中保存有利于日后再取材时细胞染色，瓶子内外亦需以标签注明号码。注意：⑴尽量保留一定量的组织⑵不要随意丢弃标本脱钙骨组织需先脱钙再取材二、细胞取材及制片收集和制片方法1.印片法2.穿刺法3.沉淀法4.活细胞标本的制备第二节组织的固定*凡是需要制作病理检查标本的各种组织，无论是制作切片标本还是大体标本，首先必须固定。固定的目的是使离体的组织、细胞尽量保持生活状态以利观察、研究。概念将各种组织浸入某些化学试剂内，使细胞内的物质能尽量保持其生活状态的形态结构和位置，叫做固定。.固定组织的目的*保持细胞与生活时的形态相似（自溶、腐败）；固定可使组织内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分凝固成不溶性物质，保持其原来结构；增加组织对染料的亲和力，易着色；组织硬化，便于取材、切片。由组织固定不当或不良对标本造成的影响是无法纠正和弥补的!固定注意事项*01040203固定的组织越新鲜越好固定液的量：约1：10固定容器：足够大,开口不宜太小固定的温度：室温(25℃)特殊类型染色对固定要求严格，组织的大小、固定的时间、温度的适当都应注意。有专家说：若你能取到新鲜的组织，能切到厚2~4mm的切块和记得固定液是十倍于组织块的总体积，你的诊断的正确性已得到了80﹪的保证。固定剂和固定液用于固定组织的化学物质称为固定剂或固定液。固定剂/单纯固定液—由单一化学物质组成混合固定液/复合固定液—由多种化学物质混合组成单纯固定液甲醛：优点●固定后的组织很少收缩。能保存脂肪和类脂质（用冰冻切片法），也可固定高尔基体、线粒体，又是糖的保存剂，使肝糖变成微细的颗粒团。穿透力强（4小时穿透深度2.7mm，8小时为4.7mm，12小时为5mm），固定均匀，能增加组织的韧性，便于取材。甲醛固定的标本核染色甚佳。价格低廉。缺点：*经甲醛固定的陈旧组织，尤以多血的肝脾组织易发生黑色或棕黑色的沉积（粒状结晶），称甲醛色素。甲醛氧化---蚁酸与血红蛋白结合—福尔马林色素避免长时间固定，固定后流水冲洗尿酸结晶可被溶解。0102甲醛固定液的配制:10%formalin市售甲醛（浓度为37~40%）1份水